B Genoma Malik Thinopyrum bessarabicum Yabanı Buğda Otu Növünün Xromosomlarının İdentifikasiyası Üçün Spesifik rapd markerlərin
Yüklə 0,81 Mb. Pdf görüntüsü
|
|
390bp OPD12 480bp OPD12 650bp OPP04 350bp OPP04 505bp OPP04 900bp OPF12 290-850bp OPC03 310bp OPB08 505bp OPAZ11 900bp 1 E b =J
+ ++ - ++ - - + + + - - 2 1 E b
1114 ++ + - - - - - - - - + 3 2 E b
1115 - ++ - ++ - - - - - - - 4 3 E b
6788 - - - - - - - - - - - 5 4 E b
1117 - - + + - - - - - - + 6 5 E b
1112 - - + +- - - - - - - - 7 6 E b
6789 - - + + - - - - - - - 8 7 E b
1110 - - + - + - - - - - + 9 ABD CS - - - - - - - - - - - 10
P 107
(R) 6740 - - + - + + - - - - + 11
T1(R) 6741
- - + - + + - - - - + 12
T2(R) 6742
- - + - + - - - - - - 13
T3(S) 6743
- - + - + + - - - - + 14
T4(R) 6744
- - + - + + - - - - + 15
P 6 (R) 5468 - - + - - - - - - - + 16
P 7 (R) 5472 - - + - - - - - - - + 17
P 8 (R) 5477 - - + - - - - - - - - 18
P 9 (S) 5474 - - + - - - - - - - + 19
P 10 (S) 5469 - - + - - - - - - - +
Yeni sin- tez olun- muş pray- merlər yeni RAPD nümunələ r ver- mişdir Müəyyən olunub Müəy- yən olunub Heç bir E b xromo- somda lo- kalizə olunmayıb Heç bir E b xro- mo- somda lokalizə olun- mayıb Bu St ge- nom mark- eri heç bir E b xromo- somda am- plifikasiya olunmayıb 1, 4, 7 E b xromo- som marker- ləri P 107 və P 29 xətlərdə vardır
Cədvəl 4. Triticum aestivum (CS) / Tynopirum bessarabicum disomik əlavə olunmuş xətlərin genom DNT üzərində RAPD markerlərlə aparılmış PZR nəticəsində sintez olunmuş müxtəlif ölçülü amplikonların 2% aqaroza gelində el- ektroforetik analizin nəticələri
1 E b =J
+ - + ++ + - ++ + - + + + 2 1 E b
1114 - + - ++ + - - - + - - - 3 2 E b
1115 - + - - - - + - + - - - 4 3 E b
6788 - - + - - - + - + - + - 5 4 E b
1117 - - - - - + + - + - + ? 6 5 E b
1112 - + - ++ - - + - + - - - 7 6 E b
6789 - + - - - - - - + + - - 8 7 E b
1110 - + + - - - ++ - + + - - 9 ABD CS - + - - - - - - + - - - 10
P 107
(R) 6740 - - - - - - - - + - - - 11
T1(R) 6741
- - - - - - ++ - + - - - 12
T2(R) 6742
- - - - - - - - + - - - 13
T3(S) 6743
- - + - - - - - + - - - 14
T4(R) 6744
- - + - - - - - + - - - 15
P 6 (R) 5468 - - - - - - ++ - + - - - 16
P 7 (R) 5472 - - - - - - ++ - + - - - 17
P 8 (R) 5477 - - + - - + - - + - - - 18
P 9 (S) 5474 - - + + - + + - + - - - 19
P 10 (S) 5469 - - + + - + + - + - - -
Heç bir E b xro- mosomda lokalizə olun- mayıb 1 E b və 5E b xro- mosom üçün müəyyən olunub P 107 və P 29 xətlər 1 E b ma- lik deyil P 107 və P 29 xətlər 3 E b , 4 E b və 6 E b malik deyil
Ə.Ç. Məmmədov 16
Təcrübələrdə bu xətlərdən istifadə olunmuşdur (Cədvəl 1). RFLP, SSR və radioizotop əsaslı AFLP molekulyar markerlərlə işləmək asan deyil və xro- mosomların identifikasiyası üçün sürətli metodlar hesab olunmur. Lakin, multifluorfor maddələrin və yarım avtomatlaşdırılmış AFLP analizin DNT-sek- venatorun tətbiqi operativliyi və dəqiqliyi təmin edir (Schwarz et al., 2000). Bu təqdiqatlar bir daha sübut etdi ki, AFLP metodu yad xromosomların identifikasiyası üçün çox güclü vasitədir. Amma, AFLP metodu ilə 3 E b və 6 E b xromosomları üçün uyğun markerlər müəyyən edilməmiş və qalan 5 xromosom üçün 13 müxtəlif marker müəyyən olun- muşdur. AFLP metodu DNT-daktiloskopiyada sə- mərəli alətdir və çoxlu sayda molekulyar marker- lərin generasiyasına imkan verir. Lakin, əksər AFLP markerlərin hədəf saytların ardıcıllığına çev- rilməsi (sequence-tagged-site- STS) çətindir, mü- rəkkəb cihazların və bahalı reaktivlərin tələb olun- ması həmçinin onun istifadə edilməsini məhdudlaş- dırır (Shan et al., 1999). Ancaq RAPD analiz bütün laboratoriyalarda praktiki olaraq istifadə olunur və əksər RAPD markerlər asanlıqla STS markerlərə çevrilə bilir. Ona görə də biz E b genomun xromo- somlarını RAPD metodu istifadə etməklə tədqiq etdik və bu metod xromosomların identifikasiyası, xəritələşməsi və introqressiyasında faydalıdır.
Cədvəl 3-dən göründüyü kimi verilən RAPD markerlərlə aparılan PZR məhsullarının aqaroza ge- lində elektroforetik analizin nəticələri əsasında 3 E b
b xromosomları üçün spesifik markerlər aşkar olunmayıb. Belə ki, cədvəldə “+”işarəsi uyğun DNT fraqmentin sintezini və “-“isə əksinə olmama- sını göstərir. Bizim elə marker seçməmiz lazımdır ki, PZR zamanı yalnız 3 E b və 6 E
b xromosomların- da uyğun ölçülü DNT fraqmenti sintez olunsun, yəni həm E b genomu üzərində və 3 E b xromosomu, eləcə də yalnız E b genomu üzərində və 6 E b xromo-
somu olan xətlərdə sintez olunsun. Bu zaman hə- min RAPD marker bu və ya digər xromosomun markeri hesab oluna bilər. Cədvəl 4-ə nəzər yetirsək, burada da 3 E b və 6
E b xromosomlar üçün xromosom spesifik markerlər qeydə alınmamışdır. Cədvəl 5-də digərlərindən fərqli olaraq T.bessarabicum-un E b genomunun 3 E b və 6 E b
b xromosomu üçün yeni RAPD markerlər aşkar olunmuşdur. 3 E b xromosomu üçün OPAY05 270 (Şəkil 1) və OPAZ04 950 (Şəkil 2) , 6 E
b
xromosomü üçün isə OPAY05 420 (Şəkil 1) RAPD markeri aşkar olunmuşdur. Bu cədvəldə 1E b xromo- somu üçün əlavə yeni RAPD marker OPAY05 370
(Şəkil 1) müəyyən edilmişdir. Ancaq E b genomun 1, 4, 5, 7 E b xromosomları üçün yeni OPAZ17 260 markeri aşkar olunmuşdur (Cədvəl 6). Cədvəl 5. Triticum aestivum (CS) / Tynopirum bessarabicum disomik əlavə olunmuş xətlərin genom DNT üzərində RAPD markerlərlə aparılmış PZR nəticəsində sintez olunmuş müxtəlif ölçülü amplikonların 2% aqaroza gelində el- ektroforetik analizin nəticələri
1 E b =J
+ + + - + - + - + - 2 1 E b
1114 - + - + + + - - - - 3 2 E b
1115 - - - - + - - - - - 4 3 E b
6788 + - - + + - + + - - 5 4 E b
1117 - - - + + + - + + - 6 5 E b
1112 - - - - - - - - - - 7 6 E b
6789 - - + - - - - - - - 8 7 E b
1110 - - - + - - - + - - 9 ABD CS - - - - - - - - - - 10
P 107
(R) 6740 - - - + - + - - - - 11
T1(R) 6741 - - - + - + - Yüklə 0,81 Mb. Dostları ilə paylaş:
|