Brazilian archives of biology and technology a n I n t e r n a t I o n a L j o u r n a L



Yüklə 99,49 Kb.
Pdf görüntüsü
tarix26.07.2017
ölçüsü99,49 Kb.

Brazilian Archives of Biology and Technology

429


Vol.48, n. 3 : pp. 429-436, May 2005

ISSN 1516-8913    Printed in Brazil



BRAZILIAN ARCHIVES OF

BIOLOGY AND TECHNOLOGY

A N   I N T E R N A T I O N A L   J O U R N A L

An Evaluation of Antibacterial Activities of Psidium

guajava (L.)

Neviton Rogério Sanches

1

, Diógenes Aparício Garcia Cortez

1

, Michelle Simone Schiavini

2

,



Celso Vataru Nakamura

2

, Benedito Prado Dias Filho

2

*

1



Departamento de Farmácia e Farmacologia; 

2

Departamento de Análises Clínicas,

 

Universidade Estadual de

Maringá; Av. Colombo 5790; 87020-900 - Maringá - PR - Brazil

ABSTRACT

The present study was designated to evaluate the antibacterial activities of aqueous and ethanol:water extracts from

leaves, roots and stem bark of Psidium guajava L. The antibacterial activities of the extracts against bacteria were

tested by using both microdilution assay. The aqueous extracts of P. guajava leaves, roots and stem bark were active

against the gram-positive bacteria Staphylococcus aureus (MICs=500, 125 and 250 

µ

g/ml, respectively) and

Bacillus subtilis (MICs=500 

µ

g/ml), and virtually inactive against the gram-negative bacteria Escherichia coli and

Pseudomonas aeruginosa (MICs >1000 

µ

g/ml). The ethanol:water extracts showed higher antimicrobial activity as



compared to aqueous extracts. Based on this finding, the ethanol:water extract of P. guajava leaves was fractionated

on silica gel column chromatography in a bioassay-guided fractionation affording flavonoid  mixture, triterpenes

(

α

- and 

β

-amyrin) and sterol (



β

-sitosterol). Flavonoid mixture showed good activity on S. aureus with MIC of 25

µ

g/ml. 

β

-sitosterol was inactive for all the bacteria tested.

Key wordsPsidium guajava, antibacterial activities, flavonoids, 

α

- and 

β

-amyrin, 

β

-sitosterol

                                           

*

 Author for correspondence



INTRODUCTION

Psidium guajava L, commonly known as guava, of

the family Myrtaceae, is a native plant of tropical

America. Different parts of the plant are used in

the indigenous system of medicine for the

treatment of various human ailments such as

wounds, ulcers, bowels and cholera (Begum et al.,

2002). Pharmacological investigations indicated

that its bark, fruit, and leaves possess antibacterial,

hypoglycemic, anti-inflammatory, analgesic,

antipyretic, spasmolytic, and CNS depressant

activities (Begum et al., 2002). In Mexico, P.

guajava leaves are extensively used to stop

diarrhea, and the quercetin and its glycosides were

its active compounds. The water, alcohol and

chloroform extracts of leaves were effective

against Aeromonas hydrophilaShigella spp. and

Vibrio spp, Staphylococcus aureusSarcina lutea

and Mycobacterium phlei (Jaiarj et al., 1999). The

leaves of P. guajava contain an essential oil rich in

cineol, tannins, triterpenes and flavonoids (Olajide

et al., 1999).

Recently, Holetz et al. (2002) had screened 13

Brazilian medicinal plants for antimicrobial

activity against bacteria and yeasts. In this study,



P. guajava extract displayed some degree of

antimicrobial activity and presented compound (s)



Sanches, N. R. et al.

Brazilian Archives of Biology and Technology

430

with Rf value of 0.68 similar to the antibacterial



compound visible on bioautogram.

The present study was undertaken to investigate

the in vitro antibacterial activity of aqueous and

ethanol:water extracts from leaves, roots and stem

barks of Psidium guajava. We are reporting our

results of the antibacterial activity of flavonoid

mixture obtained by bioassay-guided fractionation

of the ethanol:water extract of the leaves of



P.guajava.

MATERIALS AND METHODS

Preparations of extracts

The extract from leaves, roots and stem bark of

plant were prepared by maceration adding 40 g of

powder plant to ethanol:water 1:1, 7:3 and 9:1 at

room temperature and to 200 ml of distilled

deionized water and heated to about 100

°

C for 10


min under reflux

.

 The solvent was removed under



vacuum at 40

°

C and the aqueous and



ethanol:water extracts were lyophilized. The

extracts were assayed against gram-positive and

gram-negative bacteria by broth microdilution

assay to determine the MICs as described below.



Microorganisms used and growth condition

Most studies were performed with Escherichia



coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa

ATCC 15442, Bacillus subtilis ATCC 6623, and



Staphylococcus aureus ATCC 25923 obtained

from the American Type Culture Collection

(ATCC, Rockville, Md.). The bacteria

Enterococcus faecalis ATCC 29212,

Streptococcus pyogenes ATCC 19615,

Staphylococcus epidermidis ATCC 12228,

Klebsiella pneumoniae ATCC 13883,

Enterobacter cloacae ATCC 13047, Proteus

mirabilis ATCC 25933, and Shigella flexneri

ATCC 12022 were provided by Instituto Nacional

de Controle de Qualidade em Saúde, Fundação

Oswaldo Cruz (Rio de Janeiro, RJ). The

microorganisms were grown in nutrient broth

(Difco Laboratories, Detroit, MI) at 37°C and

maintained on nutrient agar slants at 4°C.

Antibacterial susceptibility testing

The minimal inhibitory concentrations (MICs) of

all the extracts and reference antibiotics

(tetracycline, vancomycin and penicillin - Sigma

Chemical Co., St. Louis, MO, US) were

determined by microdilution techniques in

Mueller-Hinton broth (Merck) according to

NCCLS (2000). Inoculates were prepared in the

same medium at a density adjusted to a 0.5

McFarland turbidity standard [10

8

 colony-forming



units (CFU)/ml] and diluted 1:10 for the broth

microdilution procedure. Microtiter plates were

incubated at 37

º

C and the MICs were recorded



after 24 h of incubation. Two susceptibility

endpoints were recorded for each isolated. The

MIC was defined as the lowest concentration of

compounds at which the microorganism tested did

not demonstrate visible growth. Minimum

bactericidal concentration (MBC) was defined as

the lowest concentration yielding negative

subcultures or only one colony.



Radial diffusion assay

For detection of antimicrobial activity, a

sensitive radial diffusion technique was used

as described earlier (Lehrer, 1991). Flavonoid

mixtures were tested against S. aureus using a

solid agarose medium. The agarose layer

consisted of 30 mg/100 ml Tryptic Soy Broth

system (BBL). in 10 mM phosphate buffer,

pH 7.2 with 0.02% Tween 20 and 0.8% GTG

agarose phase (Sigma Chemical Co.). The

plates were incubated at 37

o

C for 16 h until



growth of the microorganisms was visible.

The diameter of the clear zone was measured

and expressed in arbitrary units (0.1 mm = 1

U) after subtraction of the diameter of the well

(2 mm).

Thin layer chromatography

Kieselgel GF

254

 plates, 20 x 20 cm, 1 mm thick,



were used. Plant extracts (1 mg/ml) were applied

(50 


µ

l) and the chromatogram developed using

ethyl acetate:methanol (90:10) as solvent. TLC

plates were run in duplicate and one set was used

as the reference chromatogram. Spots and bands

were visualized by UV irradiation (254 and 365

nm) and vanillin/sulphuric acid (2%) spray

reagent


.

 The other set was used for bioautography.

Amikacin (12.8 

µ

g) (Bristol Myers Squibb) was



used as reference antibiotic.

Bioautography

Chromatograms developed as described above

were placed in a square plate with cover and an

inoculum of S. aureus containing 10

6

 CFU/ml in



An Evaluation of Antibacterial Activities of Psidium guajava (L.)

Brazilian Archives of Biology and Technology

431

molten Mueller-Hinton agar was distributed over



the plate. After solidification of the medium, the

TLC plate was incubated overnight at 37

°

C.

Subsequently the bioautogram was sprayed with



an aqueous solution of 2,3,5-triphenyltetrazolium

chloride (TTC) and incubated at 37

°

C for 4 h.



Inhibition zones indicated the presence of active

compounds.



Isolation of components

The active ethanol:water extract (7:3) from leaves

of P. guajava (14 g) was submitted to vacuum

chromatography over on silica gel (32 g) eluted

with hexane, hexane- dichlomethane (1:1),

dichlomethane,

dichlomethane:ethyl acetate (95:5),



dichlomethane:ethyl acetate (90:10);

dichlomethane:ethyl acetate (80:20),

dichlomethane:ethyl acetate (50:50) ethyl acetate,

methanol, and methanol -water (9:1) to gave ten

fractions F1 (154.0 mg), F2 (405.6 mg), F3 (158.5

mg), F4 (42.7 mg), F5 (60.2 mg), F6 (117.3 mg), F7

(170.7 mg), F8 (807.1 mg), F9 (9,100.5 mg) and

F10 (111 mg). The fractions F1 to F10 were

assayed against S. aureus by bioautography.

Combined fractions F3 to F5 (261.4 mg) was

chromatographed on a column by gel filtration over

Sephadex LH-20 eluted with methanol to give 36

sub-fractions. The sub-fraction 15, which exhibited

antibacterial properties, was further fractionated by

column chromatography on silica gel (230-400

mesh) with ethyl acetate, ethyl acetate: methanol

(95:5, 90:10, 70:30) and methanol to yield a

flavonoids mixture (1, 22.0 mg). The fraction F2

(405.6 mg) was chromatographed by Sephadex LH-

20 and eluted with methanol to give 20 sub-

fractions. Combined sub-fractions 6-12 from

column were rechromatographed on silica gel (230-

400 mesh) using ethyl acetate, ethyl

acetate:methanol (95:5, 70:30) furnished a mixture

of 

α

 and 



β

-amyrin (2, 5.8 mg). The fraction F6

(117.5 mg) was chromatographed on silica gel (70-

230 mesh) using ethyl acetate:methanol (90:10,

70:30, 50:50), methanol and methanol:water (95:5)

afforded 50 sub-fractions. Combined sub-fractions

12-18 was purified on silica gel (230-400 mesh)

using hexane, hexane:ethyl acetate (90:10, 80:20,

70:30, 50:50) and ethyl acetate to give 

β

-sitosterol



(3, 2.0 mg).

The NMR spectra were obtained in a BRUKER

DRX400 (9.4 T) and VARIAN GEMINI300

(7.05T), using deuterated solvent for field

homogeneity, TMS as internal standard and 298K.

ESI-MS: low resolution on a triple quadrupole was

recorded on a Micromass Quattro LC instrument

equipped with a “Z-spray” ion source, CC: silica

gel 60 (70-230 and 230-400 mesh) and gel

filtration on Sephadex LH-20. TLC: silica gel

plates F

254


 (0.25 mm in thickness).

RESULTS AND DISCUSSION

The results of antimicrobial activities of the

extracts by using both microdilution assay are

summarised in Table 1.



Table 1 - Minimal inhibitory concentrations (MICs) and minimal bactericidal concentrations (MBCs) of aqueous and

ethanol:water extracts of leaves, stem bark and roots from Psidium guajava



Extract

MIC(MBC) 

µµµµ


g/ml

S. aureus

B. subtilis

E. coli

P. aeruginosa

Leaves


Aqueous

500(1000)

500(1000)

>1000


>1000

Ethanol:water (50:50)

125(500)

125(250)


>1000

>1000


Ethanol:water (70:30)

125(250)


125(250)

>1000


>1000

Ethanol:water (90:10)

250(1000)

250(500)


>1000

>1000


Stem bark

Aqueous


125(250)

500(1000)

>1000

>1000


Ethanol:water (50:50)

62.5(125)

500(1000)

>1000


>1000

Ethanol:water (70:30)

62.5(125)

500(1000)

>1000

>1000


Ethanol:water (90:10)

62.5(125)

500(1000)

>1000


>1000

Roots


Aqueous

250(500)


500(1000)

>1000


>1000

Ethanol:water (50:50)

125(250)

500(1000)

>1000

>1000


Ethanol:water (70:30)

125(250)


500(1000)

>1000


>1000

Ethanol:water (90:10)

125(250)

500(1000)

>1000

>1000


Sanches, N. R. et al.

Brazilian Archives of Biology and Technology

432

Different results were obtained for the studied



extracts against gram-positive and gram-negative

bacteria. The ethanol:water extracts of P. guajava

leaves, stem bark and roots were active against the

gram-positive bacteria Staphylococcus aureus

(MICs=125, 62.5 and 125 

µ

g/ml, respectively) and



Bacillus subtilis (MICs=125, 500 and 500 

µ

g/ml,



respectively). The ethanol:water extracts showed

stronger antimicrobial activity as compared to

aqueous extracts. All extracts were virtually

inactive against the gram-negative bacteria



Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa

(MICs >1000 

µ

g/ml). Although the differences



were not significant, the stem bark ethanol:water

extracts tended to be more active (i.e. have a lower

MIC) than the leaves and roots extracts. The

results showed that leaf material could be useful

for antibacterial uses, and it could be used without

any detrimental effect on the plant.

On the basis of this finding, the dose-response

effect of the ethanol:water (70:30) extract  of P.



guajava leaves was tested with staphylococci and

enterococci (Fig 1). The EC

50

, defined as the drug



concentration that produced 50% of maximal

effect, was 150 

µ

g/ml and 600 



µ

g/ml for


ethanol:water (70:30) extract against S. aureus and

E. faecalis, respectively.

0

1



2

3

4



5

6

7



8

1

10



100

1000


concentration (µg/ml)

Log CFU/ml

Figure 1 - Dose-response effect of ethanol:water (70:30) extract  P. guajava leaves against

Staphylococcus aureus (circles) and Enterococcus faecalis (triangles)

The ethanol:water extract of leaves from P.



guajava was subjected to successive column

chromatography on silica gel and the resulting

sub-fractions were analysed by TLC on silica gel.

Fig. 2 presents the results of TLC-bioautography

screening. Panel A shows

 

the chromatogram of



plant extracts sprayed with Vanillin/Sulphuric

acid. Panel B shows the appearance of same

chromatogram after treatment with bacterial

inoculum, indicating the location of bacterial

inhibition zone at Rf values of 0.15, 0.44 and 0.70.

In the solvent system used for screening, it formed

a streak, which can extend over more than one Rf

unit, which might overlap with other active

compounds in the extracts. Also, due to clustering

of bioautography zones detected near the origin, it

was difficult to distinguish individual compounds.

Repeated silica gel and Sephadex LH-20 column

chromatography of the active extracts of P.

guajava afforded a mixture of flavonoids (1),

triterpenes (2) and sterol (3). The triterpene (

α

 and


An Evaluation of Antibacterial Activities of Psidium guajava (L.)

Brazilian Archives of Biology and Technology

433

β

-amyrin) (Maia et al., 2000) and sterol (



β

-

sitosterol) (Goular et al., 1993) were identified by



direct comparisons (TLC, UV, 

1

H and 



13

C NMR)


with authentic samples available in our laboratory.

The flavonoids group (1) could be easily detected

by spraying the TLC plates with NP/PEG (natural

products-polyethylenglycol reagent) showing

yellow colour for a monohydroxylated systems in

B ring (Wagner et al., 1984). In addition, the UV

(270, 331, 392 nm) spectra data of 1 was typical of

flavonoids.

Further confirmation of our results was obtained

by a radial diffusion assay with S. aureus. The

activity of flavonoid mixture (1) against tested

bacterium was assessed in agarose gel. A

representative view of a gel in this assay is shown

in Fig. 3A. In Fig. 3B, the activity of 1 is

expressed in units as described in Material and

Methods. The minimal concentration of 1 that

resulted in inhibition of staphylococci growth was

2.0 


µ

g. This assay was designed to achieve

maximal sensitivity with minimal consumption of

reagents and it could be used in a bioassay-guided

fractionation.

Triterpene, flavonoid and sterol obtained from P.



guajava also showed significant differences

among the tested microrganisms. In contrast to the

relatively low MICs for gram-positive bacteria,

gram-negative bacteria tested were not inhibited

by flavonoid mixture, 

α

- and 



β

-amyrin mixture

and the 

β

-sitosterol (Table 2). The results obtained



with the flavonoid mixture were more

homogeneous, and both S. aureus and E. faecalis

were considered susceptible with MICs of 25

µ

g/ml and 50 



µ

g/ml, respectively. The MICs of the

reference drugs used in this study were similar to

those presented in other reports.



Figure 2 - TLC-bioautography. One set was visualized by Vanillin/Sulphuric acid spray reagent (A and C). The

other set was used for bioautography with S. aureus (B and D) Panels A and B show the chromatogram

of fractions 1-10. Panels C and D show

 

the chromatogram of flavonoid mixture (1), 



α

- and 


β

-amyrin


(2), 

β

-sitosterol (3) and penicillin (C).



Flavonoids (derivatives of phenylchromone ring)

are a large group of compounds naturally

occurring in higher and lower plants. Flavonoids

have been shown to be able to affect various

biological functions: capillary permeability,

cellular secretory processes involved in the

inflammatory response and inhibition of enzymes,

receptors and carriers (Torel, 1983; Affany, et al.,

1987; Middleton, 1988; Afanas'ev et al., 1989).

The inhibitory activities of flavonoids against

bacteria and yeast have been investigated by a

number of researchers, especially in Latin America

(Egil et al., 1985; Mendonza et. al., 1997;

Tereschuk et al., 1997; Hernandez et al., 2000;

Jussi-Pekka et al., 2000; Fukai et al., 2002).

 


Sanches, N. R. et al.

Brazilian Archives of Biology and Technology

434

0

1



2

3

4



5

6

7



8

1

10



100

Concentration (µg/ml)

U

n

it



s

A

B

2

3



4

C+

1



C-

5

6



50

25

20



15

10

9



8

7

Figure 3 - Radial diffusion assay with S. aureus. A representative view of a gel in this assay

is shown in A. Each well was loaded with 10 

µ

l sample containing various



amounts of flavonoid mixture  (range 1

µ

g, 2



µ

g,…10


µ

g, 15 


µ

g, 20 


µ

g, 25 


µ

g, 50


µ

g, C-and C+ negative and positive controls, respectively).  In B, the activity of

flavonoid mixture (1) is expressed in units as described in Material and Methods.

The minimal concentration of flavonoid mixture (circle) that resulted in

inhibition (tendency line) of staphylococci growth was 2.0 

µ

g.



Table 2 - Minimal inhibitory concentrations (MICs) and minimal bactericidal concentrations (MBCs) of

ethanol:water (7:3) extracts of leaves, stem bark and roots from Psidium guajava



MIC(MBC) 

µµµµ


g/ml

Microorganism

Ethanol:water extracts from

Leaves


Stem bark

Roots


Flavonoid

mixture


α

 and 


β

-

amyrin



mixture

β

-



sitosterol

Gram-positive



S. aureus

125(250)


62.5(125)

125(250)


25(25)

<100

<100

S. epidermidis

250(1000)

250(1000)

250(1000)

50(100)

<100

<100

Gram-negative.



E. faecalis

62.5(500)

62.5(500)

125(1000)

50(100)

100


<100

S. pyogenes

1000


1000

1000


<100

<100

<100

K.

pneumoniae

>1000


>1000

>1000


<100

<100

<100

E. cloacal

1000


1000

1000


<100

<100

<100

P. mirabilis

1000


1000

1000


<100

<100

<100

S. flexneri

1000


1000

1000


<100

<100

<100

Olajide and Makinde (1999) reported that leaves

of P. guajava contain an essential oil rich in

cineol, tannins and triterpenes. In this study, the

analgesic and anti-inflammatory effects of

methanol extract from leaves were probably due to

the essential oils present in the plant. According to


An Evaluation of Antibacterial Activities of Psidium guajava (L.)

Brazilian Archives of Biology and Technology

435

these authors, the flavonoid content on the plant



could also be responsible for the anti-

inflammatory activity exhibited by the extract.

Gnan and Demello (1999) reported a complete

inhibition of growth of S. aureus, S. epidermidis

and S. typhimurium caused by aqueous guava leaf

extract at a concentration of 8 mg/ml. Vieira et al.

(2001) reported the microbiocidal effect of guava

sprout extract (ethanol, acetone and water) upon

toxigenic S. aureus and E. coli, performed using

radial diffusion. Extracts prepared with 60%

alcohol and 60% acetone produced the largest

halos for both species of bacteria. Abdelrahim et

al. (2002) also reported a complete inhibition of B.

subtilis, S. aureus, E. coli, and P. aeruginosa with

extract of the guava bark.

As described above, bioassay-guided fractionation

of ethanol:water extracts of leaves from P.



guajava permitted the isolation of the 

β

-sistosterol,



a mixture of flavanoids and 

α

- and 



β

-amyrin


mixture. Under the conditions employed here, the

extracts, semi-purified fractions and compounds

from leaves of P. guajava showed considerable

activity against gram-positive bacteria but not

against gram-negative species. This could to be

expected because the outer membrane of gram-

negative bacteria is known to present a barrier to

penetration of numerous antibiotic molecules, and

the periplasmic space contains enzymes, which are

able of breaking down foreign molecules

introduced from outside (Duffy and Power, 2001).

In conclusion, the results of the antibacterial

property of P. guajava extracts showed a good

correlation between reported uses of this plant in

Brazilian folk medicine against infectious diseases

and the experimental data of such extracts toward

the most common pathogens. However, the

extracts and active compound isolated from P.



guajava should be further studied in animal

models for in vitro efficacy and toxicity. In term of

conservation, the results showed that leaf material

could be useful for antimicrobial uses, and it could

be used without any detrimental effect on the

plant.


ACKNOWLEDGEMENTS

This study was supported by grants from the

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico

e Tecnológico, CNPq and Programa de Pós-

graduação em Ciências Farmacêuticas de

Universidade Estadual de Maringá. We are

grateful to Marinete Martinez Vicentim for help in

the experiments.



RESUMO

O presente estudo foi conduzido para avaliar a

atividade antibacteriana dos extratos etanol:água e

aquoso das folhas, raízes e casca do caule de



Psidium guajava L. As atividades antibacterianas

dos extratos contra as bactérias foram testados

usando o ensaio de microdiluição em caldo. O

extrato aquoso das folhas, raízes e casca do caule

de P. guajava foram ativos contra as bactérias

Gram-positivas Staphylococcus aureus

(CIMs=500, 125 e 250 

µ

g/ml, respectivamente) e



Bacillus subtilis (CIMs=500 

µ

g/ml), e foram



inativas contras as bactérias Gram-negativas

Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa

(CIMs >1000 

µ

g/ml). Os extratos etanol:água



apresentaram maior atividade quando comparados

com os extratos aquosos. Com base nestes

resultados, o extrato de folhas de P. guajava foi

fracionado em cromatografia em coluna de sílica

gel em um bioensaio de fracionamento

direcionado, produzindo uma mistura de

flavonoides, uma mistura de 

α

 e 



β

-amirina e 

β

-

sitosterol. A mistura de flavonoides mostrou boa



atividade sobre S. aureus com CIM de 25 

µ

g/ml.



β

-sitosterol foi inativo para todas as bactérias



testadas.

REFERENCE

Afanas'ev, L.; Dorozkho, A.; Broodskii, A.; Kostyuk,

V. and Pota-povitch, A.I. (1989), Chelating and free

radical scavenging mechanism of inhibitory action of

rutin and quercetin in lipid peroxida-tion. Biochem.

Pharmacol., 38, 1763-1769.

Begum, S.; Hassan, S. I.; Siddiqui, B. S.; Shaheen, F.;

Ghayur, M. N. and Gilani, A. H. (2002),

Triperpenoids from the leaves from Psidium guajava.



Phytochemistry61, 399-403.

Begum, S.; Hassan, S. I. and Siddiqui, B. S. (2002),

Two new triterpenoids from the fresh leaves of

Psidium guajavaPlanta Med.68, 1149-1152.

Begum, S.; Hassan, S. I.; Siddiqui, B. S.; Shaheen, F.

and Ghayur, A. H. (2002), Triterpenoids from

the leaves of Psidium guajavaPhytochemistry61,

399-403.


Sanches, N. R. et al.

Brazilian Archives of Biology and Technology

436

Egil K. M.; Undheim, J. and Erdal, J. E. (1985),



Synthesis Of Uvaretin. An Antitumour And

Antimicrobial Flavonoid. Tetrahedron Letters26,

4807-4810.

Fukai, T.; Marumo, A.; Kaitou, K.; Kanda T.; Terada,

S. and Nomura, T. (2002), Antimicrobial activity of

licorice flavonoids against methicillin-resistant



Staphylococcus aureusFitoterapia73, 536-539.

Gnan, S. O. and Demello, M. T. (1999), Inhibition of



Staphylococcus aureus by aqueous goiaba extracts. J.

Ethnopharmacol., 68, 103-108.

Goular, M. O. F.; Santana, A. E. G.; Lima, R. A.

and Cavalcante, S. H. (1993), Fitoconstituintes

químicos isolados de Jatropha eliptic.. Química



Nova, 16, 95-100.

Hernandez, N. E.; Tereschuk, M. L. and Abdala L. R.

(2000), Antimicrobial activity of flavonoids in

medicinal plants from Tafí del Valle (Tucumán,

Argentina). J. Ethnopharmacol., 73, 317-322.

Holetz, F. B.; Pessini, G. L.; Sanches, N. R.; Cortez, D.

A. G.; Nakamura, C. V. and Dias Filho, B. P. (2002),

Screening of some plants used in the Brazilian folk

medicine for the treatment of infectious diseases.

Mem. Inst. Oswaldo Cruz97, 1027-1031.

Jaiarj, P.; Khoohaswan, P.; Wongkrajang, Y.;

Peungvicha, P.; Suriyawong, P.; Saraya, M. L. S. and

Ruangsomboo, O. (1999), Anticough and

antimicrobial activities of Psidium guajava Linn. leaf

extract J. Ethnopharmacol.67, 203-212.

Jussi-Pekka, R.; Remes, S.; Heinonen M.; Hopia, A.;

Kahkonen, M.; Kujala T.; Pihlaja, K.; Vuorela, H.

and Vuorela, P. (2000), Antimicrobial effects of

Finnish plant extracts containing flavonoids and other

phenolic compounds.  Intern. J. of Food Microbiol.,

56, 3-12.

Lehrer, R. I.; Rosenman, M.; Harwing, S. S. L.;

Jackson, R. and Eisenhauer, P. (1991), Ultrasensitive

assays for endogenous antimicrobial polypeptides. J.



Immunol. Methods137,167-173.

Maia, R. M.; Barbosa, P. R.; Cruz, F. G.; Roque, N. F.

and Fascio, M. (2000), Triterpenos da resina de

Protium heptaphyllum March (Bourseraceae):

caracterização em misturas binárias Química Nova,



5, 623-626.

Mendonza, L.; Wilkens, M. and Urzfla, A. (1997),

Antimicrobial study of the resinous exudates and

of diterpenoids and flavonoids isolated from

same Chilean Pseudognaphalium (Asteraceae). J.

Ethnopharmacol., 58, 85:88.

Middleton, E. (1984), The flavonoids. Trends



Pharmacol Sci., 5, 334-338.

Olajide, O. A.; Awe, S. O. and Makinde, J. M. (1999),

Pharmacological studies on the leaf of Psidium

guajava Fitoterapia70, 25-31.

Roback, J. and Griglewski, R. J. (1988), Flavonoids are

scavenger of super- oxide anion. Biochem.

Pharmacol., 37, 837-841.

Tereschuk, M. L.; Riera, M. V. Q.; Castro, G. R. and

Adbala, L. R. (1997), Antimicrobial activity of

flavonoids from leaves of Tagetes minutaJ.



Ethnopharmacol., 56, 227-232.

Torel, J.; Cillard, J. and Cillard, P. (1983), Antioxidant

activity of flavonoids and reactivity with peroxy

radical. Phytochemistry, 25, 383-385.

Vieira, R. H. S. F.; Rodrigues, D. P.; Gonçalves, F. A.;

Menezes, F. G. R.; Aragão, J. S. and Sousa, O. V.

(2001), Microbicidal effect of medicinal plant

extracts (Psidium guajava LINN. and Carioca



papaya LINN.) upon bacteria isolated from fish

muscle and known to induce diarrhea in children.



Rev. Inst. Med. Trop. S. Paulo43 : (3), 145-148.

Wagner, H.; Bladt, S. and Zgainski, E. M. (1984), Plant

Drug Analysis. New York : Springer-Verlag. pp. 303.

Winkel-Shirley, B. (2001) Flavonoid biosynthesis: a

colorful model for genetics, biochemistry, cell

biology and biotechnology. Plant Physiol., 126,

485-493.

Received: December 28, 2003;

Revised: April 20, 2004;

Accepted: September 24, 2004.




Yüklə 99,49 Kb.

Dostları ilə paylaş:




Verilənlər bazası müəlliflik hüququ ilə müdafiə olunur ©azkurs.org 2020
rəhbərliyinə müraciət

    Ana səhifə