Instructions for Use Noradrenalin elisa



Yüklə 145,17 Kb.
Pdf görüntüsü
tarix21.04.2017
ölçüsü145,17 Kb.
növüInstructions

Instructions for Use

Noradrenalin ELISA

Manual and automated enzyme immunoassay for the 

in-vitro-diagnostic quantitative determination of 

noradrenalin (norepinephrine) in human plasma and urine.

RE59261

96

2-8°C

I B L

I N T E R N A T I O N A L

G M B H 

Flughafenstrasse 52a

Phone: +49 (0)40-53 28 91-0

IBL@IBL-International.com 

D-22335 Hamburg, Germany

Fax:  +49 (0)40-53 28 91-11

www.IBL-International.com

Noradrenalin ELISA (RE59261) 

ENGLISH 


 

Version 2014-12 

1 / 9 

1. 

INTENDED USE 

Manual  and  automated  enzyme  immunoassay  for  the  in-vitro  diagnostic  quantitative  determination  of 

noradrenalin (norepinephrine) in human plasma and urine. 

2. 

SUMMARY AND EXPLANATION 

The  catecholamines  adrenalin,  noradrenalin  and  dopamine  are  synthesized  in  the  adrenal  medulla,  the 

sympathetic nervous system and in the brain. They influence virtually all tissues and are involved together 

with other hormonal and neuronal systems in the regulation of a wide variety of physiological processes.  

As  catecholamines  and  their  metabolites  metanephrine  and  normetanephrine  are  secreted  in  increasing 

amounts in a number of diseases, they may be used for diagnostic purposes. 

In  this  context,  diagnosis  and  the  follow-up  of  tumor  diseases  of  the  nervous  system  are  of  special 

importance.  This  applies  primarily  to  the  pheochromocytoma,  but  also  the  neuroblastoma  and  the 

ganglioneuroma.  

Because of the extraction step at the beginning of the assay, the customer is able to use all kinds of animal 

species material. It works for rats, mice and others. The chemical structure of the catecholamines is identical 

in all animals.  



3. 

TEST PRINCIPLE 

Solid phase enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) based on the sandwich principle. The wells are 

coated with a goat anti rabbit antibody. The added liquid antibody, directed towards an epitope of an antigen 

molecule binds to the plate within the incubation time. The antigen of the sample is incubated in the coated 

well  with  enzyme  conjugated  second  antibody  (E-Ab),  directed  towards  a  different  region  of  the  antigen 

molecule.  After  the  substrate  reaction the  intensity  of  the  developed  color  is  proportional to  the  amount  of 

the antigen. Results of samples can be determined directly using the standard curve. 

4. 

WARNINGS AND PRECAUTIONS 

1.  For in-vitro diagnostic use only. For professional use only. 

2.  Before  starting  the  assay,  read  the  instructions  completely  and  carefully.  Use  the  valid  version  of  the 

package insert provided with the kit. Be sure that everything is understood.  

3.  In case of severe damage of the kit package please contact IBL or your supplier in written form, latest 

one  week  after  receiving  the  kit.  Do  not  use  damaged  components  in  test  runs,  but  keep  safe  for 

complaint related issues.  

4.  Obey lot number and expiry date. Do not mix reagents of different lots. Do not use expired reagents. 

5.  Follow  good  laboratory  practice  and  safety  guidelines.  Wear  lab  coats,  disposable  latex  gloves  and 

protective glasses where necessary.  

6.  Reagents of this kit containing hazardous material may cause eye and skin irritations. See MATERIALS 

SUPPLIED and labels for details. Material Safety Data Sheets for this product are available on the IBL-

Homepage or upon request directly from IBL.  

7.  Chemicals and prepared or used reagents have to be treated as hazardous waste according to national 

biohazard and safety guidelines or regulations. 

8.  The cleaning staff should be guided by the professionals regarding potential hazards and handling. 

9.  Avoid contact with Stop solution. It may cause skin irritations and burns. 

10. All reagents of this kit containing human serum or plasma have been tested and were found negative for 

anti-HIV I/II, HBsAg and anti-HCV. However, a presence of these or other infectious agents cannot be 

excluded  absolutely  and  therefore  reagents  should  be  treated  as  potential  biohazards  in  use  and  for 

disposal. 

5. 

STORAGE AND STABILITY 

The kit is shipped at ambient temperature and should be stored at 2-8 °C. Keep away from heat or direct 

sun  light.  The  storage  and  stability  of  specimen  and  prepared  reagents  is  stated  in  the  corresponding 

chapters. 

The  microtiter  strips  are  stable  up  to  the  expiry  date  of  the  kit  in  the  broken,  but  tightly  closed  bag  when 

stored at 2–8 °C. 



Noradrenalin ELISA (RE59261) 

ENGLISH 


 

Version 2014-12 

2 / 9 

6. 

SPECIMEN COLLECTION AND STORAGE 

 

The  in-vivo  catecholamine  and  metanephrines  release  is  influenced  by  several  foods  and  drugs. 



Vitamin  B,  coffee  and  bananas,  alpha-methyldopa,  MAO  and  COMT  inhibitors  as  well  as 

medications  related  to  hypertension  should  be  discontinued  for  at  least  72  h  prior  to  specimen 

collection. 

Plasma (EDTA) 

 

The blood sample should be stored at 2-8°C until centrifuged to separate the plasma within 2 h after 



blood collection. 

The  usual  precautions  for  venipuncture  should  be  observed.  It  is  important  to  preserve  the  chemical 

integrity  of  a  blood  specimen  from  the  moment  it  is  collected  until  it  is  assayed.  Do  not  use  grossly 

hemolytic,  icteric  or  grossly  lipemic  specimens.  Samples  appearing  turbid  should  be  centrifuged  before 

testing to remove any particulate material. 

Storage: 

2-8°C 

≤ -20°C (Aliquots) 



Keep away from heat or direct sun light. 

Avoid repeated freeze-thaw cycles. 

Ship samples frozen. 

Stability: 

6 hours 

1 month 


Urine 

It is possible to use spontaneous as well as 24 h urine. The total volume of urine excreted during a 24 h 

period  should  be  collected  and  mixed  in  a  single  bottle  containing  10-15  mL  of  6  N  HCl  as  preservative. 

Determine total volume for calculation of results. Mix and centrifuge samples before use in the assay. 

Storage: 

≤ -20°C (Aliquots) 

Keep away from heat or direct sun light. 

Avoid repeated freeze-thaw cycles. 

Stability: 

6 months 



7. 

MATERIALS SUPPLIED 

 

The reagents provided with this kit are sufficient for up to 48 single determinations in the extraction 



procedure  (6  standards,  2  controls,  40  patient  samples)  and  up  to  48  duplicates  in  the  ELISA  for 

each adrenalin and noradrenalin in plasma and urine.  

Additional reagents are available upon request. 

 

Quantity 



Symbol 

Component 

1 x 12x8 



MTP 

Microtiter Plate 

Break apart strips. Coated with anti-rabbit IgG (goat, polyclonal).

 

1 x 6 x 2.5 mL 



CAL A-F 

Standard A-F 

Adrenalin: 0; 1.5; 5.0; 15; 50; 150 ng/mL (0; 8; 27; 82; 273; 819 nmol/L) 

Noradrenalin: 0; 5.0; 15; 50; 150; 500 ng/mL (0; 30; 89; 296; 887; 2955 nmol/L) 

Dopamine: 0; 60; 180; 585; 2300; 11470 ng/mL 

(0; 392; 1175; 3819; 15014; 74876 nmol/L) 

Ready to use. Contains: [-] Adrenalin, [-] Noradrenalin, [-] Dopamine (biologically active), 

and 0.1 M HCl.

 

1 x 2 x 2.5 mL  CONTROL 1+2 



Control 1+2 

Ready to use. Contains: [-] Adrenalin, [-] Noradrenalin, [-] Dopamine (biologically active), 

0.1 M HCl. Exact concentrations see vial labels or QC certficate.

 

1 x 400 µL  ENZCONJ CONC  Enzyme Conjugate  Concentrate (50x) 



Contains: streptavidin alkaline phosphatase, Tris buffer, HCl, 0.01 % NaN

3



2 x 

EXTRPLATE 

Extraction Plate (Macrotiter Plate) 

24 wells each. Coated with boronate affinity gel. 

1 x 60 mL 

EXTRBUF 

Extraction Buffer 

Pink colored. Ready to use. Contains: 0.016 % NaN

3

.

 



2 x 1.25 mL 

COMT LYO 

COMT  lyophilized 

Contains: Catechol-O-methyltransferase (porcine liver), NaN

3



2 x 1.25 mL 



COENZ 

Coenzyme Solution 

Ready to use. Contains: S-Adenosyl-L-Methionine, stabilizers.

 

1 x 3 mL 



ENZBUF 

Enzyme Buffer 

Ready to use. Contains: Tris buffer, HCl, stabilizers.

 

2 x 13 mL 



RELEASEBUF 

Release Buffer 

Yellow Colored. Ready to use. Contains: 0.1 M HCl, indicator.

 

1 x 3 mL 



ACYLREAG 

Acylation Reagent 

Ready to use. Contains: dimethylformamide, Ethanol. Caution! Toxic. Highly flammable.

 

1 x 100 mL  WASHBUF CONC  Wash Buffer  Concentrate (10x) 



Contains: Tris buffer, HCl, Tween, 0.2 % NaN

3



Noradrenalin ELISA (RE59261) 

ENGLISH 


 

Version 2014-12 

3 / 9 

Quantity 

Symbol 

Component 

1 x 2 mL 



COMT ADD 

COMT Additive 

Contains: human plasma, stabilizers, 0.01 % Thimerosal.



 

1 x 8.0 mL  ANTISERUM NAD 



Noradrenalin Antiserum 

Blue colored. Ready to use. Contains: antibodies against Noradrenalin (rabbit), Buffer, 

stabilizers.

 

1 x 25 mL 



PNPP SUBS 

PNPP Substrate Solution 

Ready to use. Contains: p-nitrophenyl phosphate (PNPP).

 

1 x 15 mL 



PNPP STOP 

PNPP Stop Solution 

Ready to use. Contains: 1 M NaOH, 0.25 M EDTA.

 

3 x 


FOIL 

Adhesive Foil

 

8. 



MATERIALS REQUIRED BUT NOT SUPPLIED 

1.  Micropipettes (Multipette Eppendorf or similar devices, < 3 % CV). Volume: 10; 10-100; 100-1000 µL 

2.  Orbital shaker (200-900 rpm) (e.g. EAS 2/4, SLT) 

3.  Vortex mixer 

4.  8-Channel Micropipettor with reagent reservoirs 

5.  Wash bottle, automated or semi-automated microtiter plate washing system 

6.  Microtiter plate reader capable of reading absorbance at 405 nm (reference wavelength 600-650 nm) 

7.  Bidistilled or deionised water 

8.  Paper towels, pipette tips and timer 

9.  Disposable tubes for sample dilution 

10. 0.1 M HCl, for sample dilution (Urine) 

9. 

PROCEDURE NOTES 

1.  Any improper handling of samples or modification of the test procedure may influence the results. The 

indicated  pipetting  volumes,  incubation  times,  temperatures  and  pretreatment  steps  have  to  be 

performed strictly according to the instructions. Use calibrated pipettes and devices only.  

2.  Once  the  test  has  been  started,  all  steps  should  be  completed  without  interruption.  Make  sure  that 

required reagents, materials and devices are prepared ready at the appropriate time. Allow all reagents 

and  specimens  to  reach  room  temperature  (18-25  °C)  and  gently  swirl  each  vial  of  liquid  reagent  and 

sample before use. Mix reagents without foaming.  

3.  Avoid  contamination  of  reagents,  pipettes  and  wells/tubes.  Use  new  disposable  plastic  pipette  tips  for 

each  component  and  specimen.  Do  not  interchange  caps.  Always  cap  not  used  vials.  Do  not  reuse 

wells/tubes or reagents. 

4.  Some components contain ≤ 250 µL solution. Take care that the solution is completely on the bottom of 

the vial before opening.  

5.  It is advised to determine samples in duplicate to be able to identify potential pipetting errors. 

6.  Use a pipetting scheme to verify an appropriate plate layout. A pipetting scheme covering both sample 

pretreatment and assay is available at the IBL-Homepage. 

7.  Incubation time affects results. All wells should be handled in the same order and time sequences. It is 

recommended to use an 8-channel Micropipettor for pipetting of solutions in all wells.  

8.  Microplate washing is important. Improperly washed wells will give erroneous results. It is recommended 

to use a multichannel pipette or an automatic microplate washing system. Do not allow the wells to dry 

between  incubations.  Do  not  scratch  coated  wells  during  rinsing  and  aspiration.  Rinse  and  fill  all 

reagents with care. While rinsing, check that all wells are filled evenly with Wash Buffer, and that there 

are no residues in the wells. 

9.  Humidity  affects  the  coated  wells/tubes.  Do  not  open  the  pouch  until  it  reaches  room  temperature. 

Unused wells/tubes should be returned immediately to the resealed pouch including the desiccant. 


Noradrenalin ELISA (RE59261) 

ENGLISH 


 

Version 2014-12 

4 / 9 

10. 

MANUAL PROCEDURE 

10.1.  PRE-TEST SETUP INSTRUCTIONS 

 

The contents of the kit for 96 determinations can be divided into 2 separate runs. 



 

 

Visible amounts of gel can be separated from surface of extraction plate during extraction.  



This has no influence on test results. 

 

Air  contamination  by  peroxygen  containing  disinfectants  for  cleaning  of  surfaces  or 



equipment used as powder or as solutions, e.g. VIRKON

®

 must be avoided in any case. They 

will strongly disturb assay performance. VIRKON

® 

is a trademark of DuPont. 



 

10.1.1. Dilution of Samples 

Samples suspected to contain concentrations above the highest standard have to be diluted as follows: 



Sample 

to be diluted 

with 

Remarks 

Plasma 

> highest standard 

bidist. water 

prior to extraction step 



Urine 

> highest standard 

0.1 N HCl 

prior to extraction step 



10.1.2. Extraction of Samples, Standards and Controls (Extraction Plate) (manual version) 

1.    Pipette  20  µL  of  each  Standard,  Control  and  urine  sample  and  500  µL  of  each  plasma  sample 

into the respective wells of the extraction plate. Add 500 µL of bidist. water to all wells except for the 



plasma samples to correct differences of volumes.  

2.    Pipette 1000 µL of Extraction Buffer into each well.  

3.    Cover plate with adhesive foil. Extract 30 min at RT (18-25°C) on an orbital shaker (600–900 rpm).  

During extraction the surface of the liquid should wet the adhesive foil, but the liquid level should not 

exceed 2/3 of the well. Splashing does not affect results. 

4.    Remove adhesive foil. Immediately empty plate and eliminate residual fluid on a paper towel. 

5.    Pipette 2 mL of bidist water into each well.  

6.    Cover plate with new adhesive foil. 

Shake 5 min at RT (18-25°C) on an orbital shaker (600–900 rpm). Splashing does not affect results. 

7.    Remove  adhesive  foil.  Immediately  empty  plate  and  eliminate  residual  fluid  on  a  paper  towel. 

Remove fluid completely. 



8.    Pipette 150 µL of Extraction Buffer into each well. To each well add 50 µL of Acylation Reagent. 

Mix immediately after pipetting.  



9.    Extract 20 min at RT (18-25°C) (without adhesive foil) on an orbital shaker (400–600 rpm).  

10.   Immediately empty plate and eliminate residual fluid on a paper towel. Remove fluid completely. 

11.   Pipette 2 mL of bidist. water into each well.  

12.   Cover  plate  with  new  adhesive  foil.  Shake  5  min  at  RT  (18-25°C)  on  an  orbital  shaker  

(600–900 rpm). Splashing does not affect results. 



13.   Remove  adhesive  foil.  Immediately  empty  plate  and  eliminate  residual  fluid  on  a  paper  towel. 

Remove fluid completely. 



14.   Pipette 300 µL of Release Buffer into each well. 

15.   Shake 30 min at RT (18-25°C) (without adhesive foil) on an orbital shaker (400–600 rpm).  

Prepared samples should be assayed the same day. If this is not possible, you can store the extraction plate 

covered with adhesive foil at 2-8°C over night. 

10.1.3. Preparation of concentrated components 

 

The volumes stated below are for one run with 6 strips (48 determinations). 



 

Dilute / 

dissolve 

Component 

with 

Diluent 

Relation 

Remarks 

Storage  Stability 

25 mL 


WASHBUF CONC 

225 mL  bidist. water 

1:10 

Mix vigorously. 



2-8°C 

4 weeks 


120 µL 

ENZCONJ CONC 

6 mL 


WASHBUF

 

(diluted) 



1:51 

Prepare freshly and use only 

once. Mix without foaming. 

18-25°C 


5 hours 

Noradrenalin ELISA (RE59261) 

ENGLISH 


 

Version 2014-12 

5 / 9 

10.2.  TEST PROCEDURE (manual version) 

10.2.1. Preparation of COMT Enzyme Solution 

  The COMT Enzyme Solution should be freshly prepared directly (max. 15 min) before use.  

Dissolve each kit component of lyophilized COMT in 1.25 mL bidist. water and mix the dissolved COMT.* 

Then pipette 1.25 mL of Coenzyme Solution followed by 1.25 mL of Enzyme Buffer and 0.40 mL COMT 

Additive to the mixed COMT vials to give a final volume of 4.15 mL of COMT Enzyme Solution per vial.  

Use 1 vial for 48 determinations of noradrenalin. If measuring both adrenalin and noradrenalin, pool two (2) 

vials for 48 determinations of adrenalin and 48 determinations of noradrenalin. Solution may be turbid. Mix 

without foaming. 

*  If only an aliquot of the COMT solution is needed, the rest of the COMT solution should be frozen 

immediately in aliquots at -20° C. The COMT solution is stable under these conditions for 1-2 months. 

 

10.2.2. Enzymatic Derivatization of Samples, Standards and Controls (Microtiter Plate) 

 

It is recommended to start with adrenalin if measuring both adrenalin and noradrenalin.  



If pipetting with positive displacement, give the residual fluid from the tip of the pipette back to the 

corresponding  wells  of  the  extraction  plate,  otherwise  the  extracts  may  not  be  sufficient  for 

noradrenalin determination. 

It is useful to hold the extraction plate in a sloping position. 

Before use of the Microtiter plates, define and label the wells for Adrenalin and Noradrenalin. 

10.2.2.1. 

For  research  use  of  tissue  homogenates  and  cell  culture  supernatants  a  general 

recommendation can be given: 

Working with cell culture supernatants depends on the matrix as well as concentrations expected: 

According to the urine protocol (extraction of at least 20 µL supernatant) a sensitivity of 0.6 ng/mL can be 

expected.  In  case  of  a  matrix  with  addition  of  serum  (FCS),  plasma  protocol  (extraction  of  500  µL 

supernatant) 

can 


be 

used 


with 

the 


sensitivities 

corresponding 

to 

the 


plasma 

protocol  

(see 16. PERFORMANCE). 

For tissue homogenates no perchloric acid should be used for homogenization. For further details ask IBL. 



10.2.2.2. 

Noradrenalin for urine and plasma 

1.    Pipette  25  µL  of  freshly  prepared  COMT  Enzyme  Solution  into  each  well  of  the  Microtiter  Plate

Shake plate briefly. 



2.    Pipette 25 µL of each extracted Standard, Control and sample into the respective wells. During this 

step hold the pipette tips directly into the COMT solution. Color changes to pink. Shake plate briefly. 



3.    Pipette 50 µL of Noradrenalin Antiserum (blue colored) into each well. 

4.    Cover  plate  with  adhesive  foil.  Incubate  120  min  at  RT  (18-25°C)  on  an  orbital  shaker  

(400–600 rpm).   



5.    Remove  adhesive  foil.  Discard  incubation  solution.  Wash  plate  4  x  with  250-300  µL  of  diluted  

Wash Buffer. Remove excess solution by tapping the inverted plate on a paper towel. 

6.    Pipette 100 µL of freshly prepared Enzyme Conjugate into each well.  

7.    Cover  plate  with  new  adhesive  foil.  Incubate  60  min  at  RT  (18-25°C)  on  an  orbital  shaker  

(400–600 rpm).  



8.    Remove  adhesive  foil.  Discard  incubation  solution.  Wash  plate  4  x  with  250-300  µL  of  diluted  

Wash Buffer. Remove excess solution by tapping the inverted plate on a paper towel. 

9.    For  adding  of  Substrate  and  Stop  Solution  use,  if  available,  an  8-channel  Micropipettor.  Pipetting 

should  be  carried  out  in  the  same  time  intervals  for  Substrate  and  Stop  Solution.  Use  positive 

displacement and avoid formation of air bubbles. 

10.   Pipette 200 µL of PNPP Substrate Solution into each well.  

11.   Incubate 40 min at RT (18-25°C) (without adhesive foil) on an orbital shaker (400–600 rpm).  

12.   Stop  the  substrate  reaction  by  adding  50  µL  of  PNPP  Stop  Solution  into  each  well.  Briefly  mix 

contents by gently shaking the plate. 



13.   Measure  optical  density  with  a  photometer  at  405  nm  (Reference-wavelength:  620-650  nm)  within 

60 min after pipetting of the Stop Solution. No air bubbles should be visible. 

Noradrenalin ELISA (RE59261) 

ENGLISH 


 

Version 2014-12 

6 / 9 

11. 

AUTOMATED PROCEDURE 

11.1.  PRE-TEST SETUP INSTRUCTIONS (automated version) 

 

The contents of the kit for 96 determinations can be divided into 2 separate runs. 



 

 

Visible amounts of gel can be separated from surface of extraction plate during extraction. 



This has no influence on test results. 

 

Air  contamination  by  peroxygen  containing  disinfectants  for  cleaning  of  surfaces  or 



equipment used as powder or as solutions, e.g. VIRKON

®

 must be avoided in any case. They 

will strongly disturb assay performance. VIRKON

® 

is a trademark of DuPont. 



 

11.1.1. Dilution of Samples 

Samples suspected to contain concentrations above the highest standard have to be diluted as follows: 



Sample 

to be diluted 

with 

Remarks 

Plasma 

> highest standard 

bidist. water 

prior to extraction step 



Urine 

> highest standard 

0.1 N HCl 

prior to extraction step 



11.1.2. Extraction of Samples, Standards and Controls (Extraction Plate) (automated version) 

1.    Pipette  30  µL  of  each  Standard,  Control  and  urine  sample  and  750  µL  of  each  plasma  sample 

into the respective wells of the extraction plate. Add 750 µL of bidist. water to all wells except for the 



plasma samples to correct differences of volumes.  

2.    Pipette 1000 µL of Extraction Buffer into each well.  

3.    Cover plate with adhesive foil. Extract 30 min at RT (18-25°C) on an orbital shaker (600-900 rpm). 

During extraction the surface of the liquid should wet the adhesive foil, but the liquid level should not 

exceed 2/3 of the well. Splashing does not affect results. 

4.    Remove adhesive foil. Immediately empty plate and eliminate residual fluid on a paper towel. 

5.    Pipette 2 mL of bidist water into each well.  

6.    Cover plate with new adhesive foil. 

Shake 5 min at RT (18-25°C) on an orbital shaker (600–900 rpm). Splashing does not affect results. 

7.    Remove  adhesive  foil.  Immediately  empty  plate  and  eliminate  residual  fluid  on  a  paper  towel. 

Remove fluid completely. 



8.    Pipette 150 µL of Extraction Buffer into each well. To each well add 50 µL of Acylation Reagent. 

Mix immediately after pipetting.  



9.    Extract 20 min at RT (18-25°C) (without adhesive foil) on an orbital shaker (400–600 rpm).  

10.   Immediately empty plate and eliminate residual fluid on a paper towel. Remove fluid completely. 

11.   Pipette 2 mL of bidist. water into each well.  

12.   Cover plate with new adhesive foil. Shake 5 min at RT (18-25°C) on an orbital shaker (600-900 rpm). 

Splashing does not affect results. 



13.   Remove  adhesive  foil.  Immediately  empty  plate  and  eliminate  residual  fluid  on  a  paper  towel. 

Remove fluid completely. 



14.   Pipette 450 µL of Release Buffer into each well. 

15.   Shake 30 min at RT (18-25°C) (without adhesive foil) on an orbital shaker (400–600 rpm).  

Prepared samples should be assayed the same day. If this is not possible, you can store the extraction plate 

covered with adhesive foil at 2-8°C over night. 

11.1.3. Preparation of concentrated components (automated version) 

 

The volumes stated below are for one run with 6 strips (48 determinations). 



 

Dilute / 

dissolve 

Component 

with 

Diluent 

Relation 

Remarks 

Storage  Stability 

50 mL 


WASHBUF CONC 

450 mL  bidist. water 

1:10 

Mix vigorously. 



2-8°C 

4 weeks 


190 µL 

ENZCONJ CONC 

9.5 mL 


WASHBUF

 

(diluted) 



1:51 

Prepare freshly and use only 

once. Mix without foaming. 

18-25°C 


5 hours 

Noradrenalin ELISA (RE59261) 

ENGLISH 


 

Version 2014-12 

7 / 9 

11.2.  TEST PROCEDURE (automated version) 

11.2.1. Preparation of COMT Enzyme Solution 

  The COMT Enzyme Solution should be freshly prepared directly (max. 15 min) before use.  

Dissolve each kit component of lyophilized COMT in 1.25 mL bidist. water and mix the dissolved COMT.* 

Then pipette 1.25 mL of Coenzyme Solution followed by 1.25 mL of Enzyme Buffer and 0.40 mL COMT 

Additive to the mixed COMT vials to give a final volume of 4.15 mL of COMT Enzyme Solution per vial.  

Use 1 vial for 48 determinations of noradrenalin. If measuring both adrenalin and noradrenalin, pool two (2) 

vials for 48 determinations of adrenalin and 48 determinations of noradrenalin. Solution may be turbid. Mix 

without foaming. 

*  If only an aliquot of the COMT solution is needed, the rest of the COMT solution should be frozen 

immediately in aliquots at -20° C. The COMT solution is stable under these conditions for 1-2 months. 

 

11.2.1.1. 

For research use of tissue homogenates and cell culture supernatants a general 

recommendation can be given: 

Working with cell culture supernatants depends on the matrix as well as concentrations expected: 

According to the urine protocol (extraction of at least 20 µL supernatant) a sensitivity of 0.6 ng/mL can be 

expected.  In  case  of  a  matrix  with  addition  of  serum  (FCS),  plasma  protocol  (extraction  of  500  µL 

supernatant) 

can 


be 

used 


with 

the 


sensitivities 

corresponding 

to 

the 


plasma 

protocol  

(see 16. PERFORMANCE). 

For tissue homogenates no perchloric acid should be used for homogenization. For further details ask IBL. 



11.2.1.2. 

Noradrenalin for urine and plasma 

1.    Pipette  25  µL  of  freshly  prepared  COMT  Enzyme  Solution  into  each  well  of  the  Microtiter  Plate

Shake plate 1 min. 



2.    Pipette  25  µL  of  each  extracted  Standard,  Control  and  sample  into  the  respective  wells.  

Shake plate 1 min. 



3.    Pipette 50 µL of Noradrenalin Antiserum (blue colored) into each well. 

4.    Cover plate. Incubate 120 min at RT (18-25°C) on an orbital shaker (400–600 rpm).  

5.    Discard incubation solution. Wash plate 6 x with 250-300 µL of diluted Wash Buffer.  

6.    Pipette 100 µL of Enzyme Conjugate into each well.  

7.    Cover plate. Incubate 60 min at RT (18-25°C) on an orbital shaker (400–600 rpm).  

8.    Discard incubation solution. Wash plate 6 x with 250-300 µL of diluted Wash Buffer.  

9.    Pipetting should be carried out in the same time intervals for Substrate and Stop Solution. 

10.   Pipette 200 µL of PNPP Substrate Solution into each well.  

11.   Incubate  40 min  at  RT  (18-25°C)  on  an  orbital  shaker  (400–600  rpm).  If  temperature  in automat 

exceeds 25°C, shorten incubation time to 30 min to avoid signal overflow.

 

12.   Stop  the  substrate  reaction  by  adding  50  µL  of  PNPP  Stop  Solution  into  each  well.  Briefly  mix 

contents by gently shaking the plate. 

13.   Measure  optical  density  with  a  photometer  at  405  nm  (Reference-wavelength:  620-650  nm)  within 

60 min after pipetting of the Stop Solution.  

12. 

QUALITY CONTROL 

The test results are only valid  if the test has been performed following the instructions. Moreover the user 

must  strictly  adhere  to  the  rules  of  GLP  (Good  Laboratory  Practice)  or  comparable  standards/laws.  User 

and/or laboratory must have a validated system to get diagnosis according to GLP. All kit controls must be 

found within the acceptable ranges as stated on the labels and the QC certificate. If the criteria are not met, 

the run is not valid and should be repeated. Each laboratory should use known samples as further controls. 

It is recommended to participate at appropriate quality assessment trials.  

In  case  of  any  deviation  the  following  technical  issues  should  be  proven:  Expiration  dates  of  (prepared) 

reagents, storage conditions, pipettes, devices, incubation conditions and washing methods. 


Noradrenalin ELISA (RE59261) 

ENGLISH 


 

Version 2014-12 

8 / 9 

Noradrenalin ELISA

0.000


0.500

1.000


1.500

2.000


1

10

100



1000

(ng/L)


(OD)

13. 

CALCULATION OF RESULTS 

The obtained OD of the standards (y-axis, linear) are plotted against their concentration (x-axis, logarithmic) 

either  on  semi-logarithmic  graph  paper  or  using  an  automated  method.  A  good  fit  is  provided  with  cubic 

spline, 4 Parameter Logisitcs or Logit-Log.  

For the calculation of the standard curve, apply each signal of the standards.  

The concentration of the kit Controls and of the urine samples can be read directly from the corresponding 

standard  curve.  Due  to  the  pipetting  volume  of  500  µL  (automated  version:  750  µL)  for  plasma  in 

comparison to 20 µL (automated version: 30 µL) for the standards, the results for plasma samples have to 

be divided by 25. For units in pg/mL please multiply by 1000. 

In case of diluted samples the values have to be multiplied with the corresponding dilution factor. 

Samples showing concentrations above the highest standard have to be diluted as described in PRE-TEST 

SETUP INSTRUCTIONS and reassayed. 

Calculate the 24 h excretion for each urine sample:  

µg/24 h = µg/L x L/24 h 

Conversion: 

1000 pg/mL = 1 ng/mL 

Noradrenalin (µg/L) x 5.911 = nmol/L 

 

Typical Calibration Curve (Noradrenalin) 

(Example. Do not use for calculation!) 

Standard 

Noradrenalin 

(ng/mL) 

OD

Mean 



 

OD/OD


max

 

(%)  



0.223 



0.0 



0.322 

6.7 


15 


0.539 

21.3 


50 


0.984 

51.2 


150 


1.438 

81.8 


500 


1.708 

100 


 

14. 

EXPECTED VALUES 

The results themselves should not be the only reason for any therapeutical consequences. They have to be 

correlated to other clinical observations and diagnostic tests. 

Apparently healthy subjects show the following values:  (5 % - 95 % percentile) 

It is recommended that each laboratory establishes its own range of normal values. 

 

 

Urine 

Plasma 


µg/d 

nmol/d 


pg/mL 

nmol/L 


Noradrenalin 

< 90 

< 535 

< 600 

< 3.55 

15. 

LIMITATIONS OF THE PROCEDURE 

Specimen  collection  has  a  significant  effect  on  the  test  results.  See  SPECIMEN  COLLECTION  AND 

STORAGE for details. 

For cross-reactivities, see PERFORMANCE. 

The following blood components do not have a significant effect (+/-20% of expected) on the test results up 

to the below stated concentrations: 

 

Hemoglobin 



2.0 mg/mL 

Bilirubin 

1.0 mg/mL 

Triglyceride 

91 mg/mL 

 


Noradrenalin ELISA (RE59261) 

ENGLISH 


 

Version 2014-12 

9 / 9 

16. 

PERFORMANCE 

Analytical Specificity 

(Cross Reactivity) 

Substance 

Noradrenalin 

Cross-reactivity of other substances 

tested < 0.02 % 

Adrenalin 



< 0.02 

Noradrenalin 

100 

Metanephrine 



< 0.002 

Normetanephrine 



< 0.005 

Analytical Sensitivity 

(Limit of Detection) 

Urine 


0.6 ng/mL 

Mean signal (Zero-Standard) + 2SD 

Plasma 

20 pg/mL 



Precision 

 

Range (ng/mL) 



CV (%) 

 

Intra-Assay 



Urine 

16 – 256 

7.3 

Plasma 


0.560 – 12.83 

7.4 


Inter-Assay 

Urine 


15.4 – 391.5 

12.1 


Plasma 

0.569 – 1.945 

12.5 

Linearity 

 

Range (ng/mL) 



Serial dilution up to 

Range (%) 

Urine 

5.1 - 423 



1:32 

85 – 115 

Plasma 

0.02 – 8.2 



1:32 

89 - 111 

No High dose hook effect detected. 

Recovery 

 

Mean (%) 



Range (%) 

% Recovery after spiking 

Urine 

100.9 


81 – 116 

Plasma 


97.5 

83 – 111 



Method Comparison  

versus HPLC 

IBL = 0.75 x HPLC + 4.8 

r = 0.945; n = 134 

17. 

PRODUCT LITERATURE REFERENCES 

1.  Creces J., Appleton Ch.: Catecholamines and their Metabolites: Evaluation of a commercial ELISA. Clin. 

Biochem., QML Pathology, Brisbane QLD (2004) 

2.  Westermann J, Hubl W, Kaiser N, Salewski L, Simple, rapid and sensitive determination of epinephrine 

and  norepinephrine  in  urine  and  plasma  by  non-competitive  enzyme  immunoassay,  compared  with 

HPLC method. Clin. Lab., 48: 61-71 (2002) 

 


Symbols  /  Symbole  /  Symbôles  /  Símbolos  /  Símbolos  /  Σύµβολα 

 

IBL AFFILIATES WORLDWIDE 



 

 

IBL International GmbH 

Flughafenstr. 52A, 22335 Hamburg, Germany 

Tel.: 

+ 49 (0) 40 532891 -0  Fax: -11 



E-MAIL: 

IBL@IBL-International.com 

WEB: 

http://www.IBL-International.com 



 

IBL International Corp. 

194 Wildcat Road, Toronto, Ontario M3J 2N5, Canada 

Tel.: 

+1 (416) 645 -1703  Fax: -1704 



E-MAIL:   Sales@IBL-International.com 

WEB:  


http://www.IBL-International.com 

 

 

LIABILITY: Complaints will be accepted in each mode –written or vocal. Preferred is that the complaint is accompanied with the test performance 

and results. Any modification of the test procedure or exchange or mixing of components of different lots could negatively affect the results. These 

cases invalidate any claim for replacement. Regardless, in the event of any claim, the manufacturer’s liability is not to exceed the value of the test kit. 

Any damage caused to the kit during transportation is not subject to the liability of the manufacturer 

 

Symbols Version 3.5 / 2012-01-20 



 

REF 


Cat.-No.: / Kat.-Nr.: / No.- Cat.: / Cat.-No.: / N.º Cat.: / N.–Cat.: / Αριθµός-Κατ.: 

LOT


 

Lot-No.: / Chargen-Bez.: / No. Lot: / Lot-No.: / Lote N.º: / Lotto n.: / Αριθµός -Παραγωγή: 

 

Use by: / Verwendbar bis: / Utiliser à: / Usado por: / Usar até: / Da utilizzare entro: / 



Χρησιµοποιείται

 από: 


 

No. of Tests: / Kitgröße: / Nb. de Tests: / No. de Determ.: / N.º de Testes: / Quantità dei tests: / 

Αριθµός

 εξετάσεων: 



CONC  Concentrate / Konzentrat / Concentré / Concentrar / Concentrado / Concentrato / Συµπύκνωµα 

LYO 


Lyophilized / Lyophilisat / Lyophilisé / Liofilizado / Liofilizado / Liofilizzato / Λυοφιλιασµένο 

IVD 


In Vitro Diagnostic Medical Device. / In-vitro-Diagnostikum. / Appareil Médical pour Diagnostics In 

Vitro.  /  Dispositivo  Médico  para  Diagnóstico  In  Vitro.  /  Equipamento  Médico  de  Diagnóstico  In 

Vitro. / 

Dispositivo Medico Diagnostico In vitro. / 

Ιατρική

 συσκευή για In-Vitro ∆ιάγνωση. 



 

Evaluation kit. / Nur für Leistungsbewertungszwecke. / Kit pour évaluation. / Juego de Reactivos 

para Evaluació. / Kit de avaliação. / Kit di evaluazione. / Κιτ Αξιολόγησης. 

 

Read instructions before use. / Arbeitsanleitung lesen. / Lire la fiche technique avant emploi. / 



Lea las instrucciones antes de usar. / Ler as instruções antes de usar. / Leggere le istruzioni 

prima dell’uso. / ∆ιαβάστε τις οδηγίες πριν την χρήση. 

 

Keep away from heat or direct sun light. / Vor Hitze und direkter Sonneneinstrahlung schützen. / 



Garder à l’abri de la chaleur et de toute exposition lumineuse. / Manténgase alejado del calor o la 

luz solar directa. / Manter longe do calor ou luz solar directa. / Non esporre ai raggi solari. / Να 

φυλάσσεται

 µακριά από θερµότητα και άµεση επαφή µε το φως του ηλίου. 

 

Store at: / Lagern bei: / Stocker à: / Almacene a: / Armazenar a: / Conservare a: / Αποθήκευση 



στους

 



Manufacturer: / Hersteller: / Fabricant: / Productor: / Fabricante: / Fabbricante: / Παραγωγός: 

 

Caution! / Vorsicht! / Attention! / ¡Precaución! / Cuidado! / Attenzione! / Προσοχή! 



Symbols of the kit components see MATERIALS SUPPLIED. 

Die Symbole der Komponenten sind im Kapitel KOMPONENTEN DES KITS beschrieben. 

Voir MATERIEL FOURNI pour les symbôles des composants du kit. 

Símbolos de los componentes del juego de reactivos, vea MATERIALES SUMINISTRADOS. 

Para símbolos dos componentes do kit ver MATERIAIS FORNECIDOS. 

Per i simboli dei componenti del kit si veda COMPONENTI DEL KIT. 



Για

 τα σύµβολα των συστατικών του κιτ συµβουλευτείτε το  ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ. 



 


Yüklə 145,17 Kb.

Dostları ilə paylaş:




Verilənlər bazası müəlliflik hüququ ilə müdafiə olunur ©azkurs.org 2020
rəhbərliyinə müraciət

    Ana səhifə