Лабораторная работа №3 Определение содержания гемоглобина по методу Сали Оборудование и реактивы



Yüklə 185,13 Kb.
tarix06.02.2020
ölçüsü185,13 Kb.
növüЛабораторная работа

Лабораторная работа №3 Определение содержания гемоглобина по методу Сали

Оборудование и реактивы

  • - гемометр Сали,
  • - капиллярная пипетка от гемометра Сали,
  • - глазная пипетка,
  • - стеклянная палочка,
  • - часовое стекло,
  • - 0,1 н. раствор соляной кислоты,
  • - дистиллированная вод,
  • - фотоэлектроколориметр (ФЭК) или спектрофотометр с зеленым светофильтром и кюветами
  • толщиной 1 см;
  • - химические пробирки с пробками;
  • - капиллярная пипетка от гемометра Сали объемом 20 мкл;
  • - градуированная пипетка на 5 мл;
  • - раствор Драбкина.

Гемоглобин - это дыхательный пигмент, содержащийся в эритроцитах. Его количество в организме выражается в г/л и имеет важное диагностическое значение. Определять содержание гемоглобина можно двумя способами: по Сали и цианметгемоглобиновым методом.

  • Гемоглобин - это дыхательный пигмент, содержащийся в эритроцитах. Его количество в организме выражается в г/л и имеет важное диагностическое значение. Определять содержание гемоглобина можно двумя способами: по Сали и цианметгемоглобиновым методом.
  • Наиболее распространенным и простым является метод определения гемоглобина по Сали. Однако он дает ряд объективных (постепенное усиление окраски) и субъективных (визуальное сравнение цвета) ошибок.
  • Цианметгемоглобиновый метод является наиболее точным.

Метод определения гемоглобина по Сали

  • Приготовление 0,1 н. раствора соляной кислоты:
  • - на 1 л дистиллированной воды добавляют химически чистой 8,2 куб. см соляной кислоты с удельным весом 1,19 либо 0,1 н. фиксанал соляной кислоты.

Ход определения и учет результатов

  • В градуированную пипетку гемометра Сали до метки "2" глазной пипеткой наливают децинормальный раствор соляной кислоты.
  • В капиллярную пипетку от гемометра Сали набирают кровь до метки 20 мкл и выдувают ее в раствор соляной кислоты.
  • Полученную смесь перемешивают стеклянной палочкой и оставляют на 10 минут. По истечении этого времени в пробирку по каплям доливают дистиллированную воду и, перемешивая стеклянной палочкой, подбирают цвет рабочего раствора до совпадения с цветом жидкости в стандартных пробирках.
  • Количество гемоглобина отсчитывают по нижнему мениску рабочего раствора на градуированной пробирке (показатели в г % выражают в г/л), 1 г % равен 10 г/л.

Цианметгемоглобиновый фотометрический метод

  • Приготовление раствора Драбкина, на 1 л реактива берут:
  • Бикарбонат натрия - 1 г, красная кровяная соль - 0,2 г, цианистый калий или натрий - 0,05 г,
  • дистиллированная вода - остальной объем.

Ход определения и учет результатов

  • Мерной пипеткой в пробирку наливают 5 мл трансформирующего раствора Драбкина. Пипеткой от гемометра Сали добавляют 20 мкл крови.
  • Содержимое пробирки хорошо перемешивают и оставляют в холодильнике на 20 минут. По истечении этого времени рабочий и трансформирующий растворы наливают в кюветы и, используя зеленый светофильтр, проводят измерения на ФЭКе.
  • Расчет концентрации гемоглобина (г/л) на основе данного определения проводят по формуле:
  • Х = х 367,1 г/л, где:
  • - показания ФЭК;
  • 367,1 - коэффициент пересчета, учитывающий разведение крови, миллимолярный вес гемоглобина и другие показатели.
  •  

Определение гематокритной величины

  • Гематокритное число - это отношение объема эритроцитов к общему объему крови, выраженное в л/л (1 л/л равен 100%).
  • 1. Подготовка к исследованию

  • Приготовление растворов антикоагулянта:
  • - раствор Геллера и Пауля:
  • на 100 мл воды: щавелевокислый аммоний - 1,2 г, щавелевокислый калий - 0,8 г;
  • - 5% раствор трехзамещенного лимоннокислого натрия.

2. Ход определения и учет результатов

  • Микрокапилляры предварительно обрабатывают одним из растворов антикоагулянта. Можно несколько раз сполоснуть их раствором гепарина и высушить при комнатной температуре или же в капилляры насасывают на 1/10 часть раствора Геллера и Пауля и высушивают в сушильном шкафу при 60 °С.
  • В подготовленные таким образом капилляры набирают кровь. Конец капилляра закупоривают с помощью замазки и ставят центрифугировать до получения постоянного объема эритроцитов. Время центрифугирования зависит от скорости вращения центрифуги.
  • Достигают эффекта полного осаждения эритроцитов. Отсчет объема эритроцитов и плазмы производят при помощи миллиметровой линейки.
  • Процентное отношение столба эритроцитов к высоте всего столба крови является гематокритной величиной, которое переводят в размерность л/л.

Определение белка в сыворотке крови

  • Содержание белка в сыворотке крови рыб служит экспресс-тестом для определения уровня физиологического состояния рыб при выращивании в современных рыбоводных хозяйствах.
  • Концентрацию белка выражают в г % или в г/л; 1 г/л равен 10 г %.

Ход определения и учет результатов

  • 2 - 3 мл крови помещают в подготовленные уленгутки или небольшие пробирки. После этого кровь центрифугируют 5 минут при 3000 об./мин.
  • В случае отсутствия центрифуги проводят отстаивание крови в холодильнике 30 - 45 минут. Полученная после центрифугирования или отстаивания сыворотка отсасывается чистой пастеровской пипеткой и несколько ее капель помещают на пластинку рефрактометра. Регистрируют показатель преломления по его шкале.
  • По таблице 1, приведенной ниже, определяют содержание белка в сыворотке крови. После каждого исследования обе поверхности призм протирают марлевым тампоном, смоченным в спирте.

Концентрация белка (в г %) при различном показателе преломления


Yüklə 185,13 Kb.

Dostları ilə paylaş:




Verilənlər bazası müəlliflik hüququ ilə müdafiə olunur ©azkurs.org 2020
rəhbərliyinə müraciət

    Ana səhifə