Katı Besiyerinde Toplam Mezofil Aerob Bakteri Sayımı
U.V. Negatif Pozitif A06
Yüklə 235,92 Kb. Pdf görüntüsü
|
- Bu səhifədəki naviqasiya:
- Hızlı EMS Yöntemiyle E. coli Sayımı
- Not: Kendiliğinden floresan veren tüpler bu analizde kullanılmaz A07
- Kullanılan Malzeme
- Verotoksin Belirlenmesi A09 A09 Verotoksin Belirlenmesi
- Salmonella Analizi (Var/ Yok Testi; ISO 6579-2002)
- Listeria monocytogenes Analizi (Var/ Yok Testi)
|
U.V. Negatif
Pozitif A06 A06 Koliform Grup Bakterilerin Membran Filtrasyon Yöntemi ile Sayılması Su, berrak meyve suları vb. gıdalarda düşük sayıdaki koliform grup bakterilerin analizi, membran filtrasyon yöntemi ile yapılır. Su ve gıdaların membran filtrasyonla koliform bakteri analizinde sıklıkla VRB Agar, Chromocult Coliform Agar ya da Chromocult Coliform Agar ES kullanılır. “Lactose TTC Agar with Tergitol 7” besiyeri, ISO 9308’e göre suların membran filtrasyon yöntemi ile analizinde kullanılmaktadır. Not: Membran filtrasyon uygulamasında seçilen inkübasyon sıcaklığı ne olursa olsun, Petri kutusu inkübatöre tabanı üzerine yerleştirilir. İnkübasyon süresince filtre üzerine su damlası düşmemesi için agar yüzeyi yeteri kadar kuru olmalıdır.
Maximum Recovery Diluent (Merck 1.12535) ¼ Ringer Çözeltisi (Merck 1.15525) VRB Agar (Merck 1.01406) Lactose TTC Agar with Tergitol 7 (Merck 1.07680) Chromocult Coliform Agar (Merck 1.10426) Chromocult Coliform Agar ES (Merck 1.00850) Bactident E. coli (Merck 1.13303) UV El Lambası (Merck 1.13203)
-Gıda ya da su örneği, mikrobiyolojik analiz kurallarına uyularak laboratuvara getirilir. Katı gıda tartılır ve homojenize edilir. Sıvı gıda doğrudan analize alınabilir. -Homojenizasyon gerekli ise Maximum Recovery Diluent kullanılır. Yağsız süt ürünleri -ön filtrasyon koşuluyla- ¼ Ringer çözeltisi ile homojenize edilir. -Örnek, membran filtrasyondan geçirilir ve filtre Petri kutusunda hazırlanmış besiyeri üzerine yerleştirilir. Bu amaçla standart 9 cm ya da filtreye uygun olmak üzere 6 cm çaplı Petri kutuları kullanılır. Filtre, besiyeri üzerine yerleştirilirken bakterilerin tutulmuş olduğu yüzeyin, üste gelecek şekilde olmasına dikkat edilir. -Petri kutusu -kapağı üste gelecek şekilde (tabanı üzerine)- seçilmiş inkübasyon sıcaklığında 18-24 saat inkübasyona bırakılır. İnkübasyon sıcaklığı, ilgili talimatta ve analiz raporunda belirtilmelidir. -VRB Agar besiyerinde 1-2 mm çaplı koyu kırmızı renkli koloniler koliform grup bakteri olarak sayılır. E. coli dışındaki koliformlar; Chromocult Coliform Agar ve Chromocult Coliform Agar ES besiyerinde 1-2 mm çaplı somon-kırmızı renkli koloni oluştururlar. Bu uygulamada, her iki besiyerinde de koyu mavi-menekşe renkli
ayrı olarak rapora geçilir. -Lactose TTC Agar with Tergitol 7 besiyerinde sarı-portakal renkli koloniler koliform grup bakteri olarak değerlendirilir. Bu besiyerinde koliform grup ve E. coli, koloni morfolojisi ile ayrılamaz. Kolonilerin E. coli olup olmadığının anlaşılması Bactident E. coli ile yapılabilir. Bu amaçla 0,2 mL damıtık su, kitin özel küvetine aktarılır ve öze ile alınan koloni bu suyun içinde çözülüp 37 o C’da inkübasyona bırakılır. 2 saat sonra UV el lambası ile kontrol edilir, floresan ışıma, E. coli olarak değerlendirilir. -Sayım ya da var/yok analiz sonuçları standart şekilde verilir. -Değerlendirme sonrası, mikroorganizma gelişmesi olmayanlar da dahil olmak üzere inkübatörden çıkan tüm malzeme sterilize edildikten sonra yıkanır/atılır. Hızlı EMS Yöntemiyle E. coli Sayımı o Tüpler 35-37 C'da 24 saat inkübasyona bırakılır. U.V. U.V. U.V. Bulanıklık ve Durham tüplerinde gaz oluşumu görülen koliform grup pozitif tüpler loş bir yerde kısa dalga boylu UV lambası (Merck 1.13203) ile incelenir. Bunlardan floresan ışıma verenler E. coli olarak değerlendirilir. Floresan ışımadan emin olunmazsa tüplere 1 mL 1 N NaOH eklenip tekrar incelenir. EMS tablosu kullanılarak gıdadaki E. coli sayısı hesaplanır. Sterilizasyondan sonra tüpler yıkanır. 10 g (mL), gıda 90 mL MRD (Merck 1.12535) ile homojenize -2
-3 edilir. 10 ve katı gıdalarda 10 seyreltiler hazırlanır. İçlerinde Durham tüpü bulunan Fluorocult LST Broth (Merck -1
-2 -3 1.12588) besiyerinden; katı gıdalarda 10 ; 10 ve 10 , sıvı 0 -1
-2 gıdalardan 10 ; 10 ve 10 seyreltilerden olmak üzere 3'er tüpe 1'er mL ekim yapılır.
A07 Hızlı EMS Yöntemiyle E. coli Sayımı Bu yöntemde koliform grup bakteriler ve E. coli beraberce sayılır. Bir diğer deyiş ile ekimi yapılan tüpler önce standart yöntemle koliform bakteri açısından değerlendirilir, koliform grup pozitif olanlar UV el lambası ile
katkı ilavesi söz konusu değildir. Kullanılan Malzeme Maximum Recovery Diluent (Merck 1.12535) ¼ Ringer Çözeltisi (Merck 1.15525) Fluorocult LST (MUG) Broth (Merck 1.12588) UV El Lambası (Merck 1.13203) Kovacs’ İndol Çözeltisi (Merck 1.09293) 1 N NaOH (Merck 1.06462)
-Gıda örneği, mikrobiyolojik analiz kurallarına uyularak laboratuvara getirilir. Katı gıda tartılır ve homojenize edilir. Sıvı gıda doğrudan analize alınabilir. -Homojenizasyon ve/ veya gerekli ise seyreltmeler için, süt ve ürünlerinde tercihen ¼ Ringer çözeltisi, diğer gıdalarda Maximum Recovery Diluent kullanılır. -En Muhtemel Sayı yöntemi ile analiz kurallarına uyularak Fluorocult LST Broth tüplerine ekim yapılır. Gerekiyorsa Fluorocult LST Broth besiyeri başlangıçta çift kuvvet olarak hazırlanır. -İnkübasyon, 37 o C’da 24±2 saat süre ile yapılır. Bazı standartlarda üreme (gaz) görülmemesi halinde ilave 24±2 saat daha inkübasyon önerilmektedir. Günlük kontrolde 24 saat inkübasyon yeterlidir. -İnkübasyon sonunda bakteri gelişmesine bağlı olarak bulanıklık ve gaz görülen tüpler, “koliform grup pozitif” olarak işaretlenir. EMS çizelgesinden yararlanılarak koliform grup bakteri sayısı hesaplanır ve sonuç EMS/g (mL) olarak verilir. -Koliform grup pozitif olan tüpler UV el lambası ile tercihen loş bir yerde kontrol edilir. Bunlardan floresan ışıma verenler E. coli pozitif olarak işaretlenir. EMS çizelgesinden yararlanılarak E. coli sayısı hesaplanıp, sonuç EMS/g (mL) olarak verilir. Koliform negatif sonuç veren (Durham tüpünde gaz görülmeyen) tüpler UV lamba ile kontrol edilmez. -MUG reaksiyonunda sahte pozitif sonuçlardan kaçınmak için indol testi uygulanabilir. Floresan ışıma görülen tüplere 1 mL Kovacs’ indol çözeltisi damlatılır, elle yavaşça karıştırılır, en geç 1 dakika (genellikle 5-10 saniye) içinde besiyeri yüzeyinde vişne çürüğü renkli halka toplanması indol testinin pozitif olduğunu gösterir. E coli, MUG ve indol pozitif tek bakteridir. MUG negatif tüplere indol testi uygulanmaz. Fluorocult LST Broth’ta indol testi yapılabilir, ilave bir aşılamaya gerek yoktur. Günlük gıda kontrolünde pozitif MUG sonuçlarının indol testi ile doğrulanması gerekli değildir. Bu test daha çok araştırma esaslı çalışmalarda uygulanır. -Değerlendirme sonrası, mikroorganizma gelişmesi olmayanlar da dahil olmak üzere inkübatörden çıkan tüm malzeme sterilize edildikten sonra yıkanır/atılır. İndol testi uygulanmış tüpler otoklavlanmaz, bunlar bir gece boyunca kendi halinde bırakılarak kendiliğinden (oto) sterilizasyon sağlanır.
Bu durumda tüpe 1 mL 1 N NaOH (4 g/100 mL) ilavesi, karıştırılması ve tekrar floresan kontrolü gerekir. NaOH ilavesi, daha sonra yapılacak indol testini etkilemez.
veren tüplerin bu testte kullanılmaması gerekir. ® Singlepath E. coli O157 Kiti ile Hızlı Tayin A08 A08 Singlepath E. coli O157 Kiti ile Hızlı Tayin Singlepath E. coli O157 test kiti kullanarak -katı besiyerinde izolasyon aşamasına gerek kalmadan- 24 saatten kısa bir süre içinde ve “hızlı analiz yaklaşımı ile” gıdada E. coli O157 serotiplerinin varlığının araştırılması çoğu laboratuvarda günlük analiz içinde yer almaktadır. Not 01: mEC Broth besiyerinin et ürünlerinde, mTS Broth besiyerinin süt ürünlerinde kullanılması önerilmektedir. Not 02: Singlepath E. coli O157 Test Kiti, O157 serotiplerine özgüldür. Dolayısı ile pozitif sonuç alınırsa standart kültürel yöntemlerle analize devam edilip, gıdada E. coli O157:H7 serotipinin varlığı araştırılır. Negatif sonuçta ise “O157 serotipi olmadığı için O157:H7 serotipi de yoktur” yaklaşımı ile analize son verilir. Not 03: Test kiti analizden 2 saat önce buzdolabından çıkarılıp, oda sıcaklığına getirilmeli ve alüminyum poşeti açıldıktan sonra 30 dakika içinde kullanılmalıdır.
m TS Broth (Merck 1.09205) m EC Broth (Merck 1.14582) Singlepath E. coli O157 Test Kiti (Merck 1.04141) Analiz -Gıda örneği, mikrobiyolojik analiz kurallarına uyularak laboratuvara getirilir. Katı gıda tartılır ve doğrudan modifiye Tryptic Soy (mTS) Broth ya da modifiye EC (mEC) Broth besiyerinde homojenize edilir. Sıvı gıda bu besiyerlerine eklenir ve 37 o C’da 24 saat inkübe edilir. Her iki besiyeri de novobiosin içermekte olup, otoklav sonrası ayrıca novobiosin ilavesine gerek yoktur. Bu özellik, sadece granül yapısında olan besiyerlerinde vardır. -Bu süre sonunda besiyerinden cam bir tüpe 1-2 mL kadar alınıp kaynar su banyosunda 15 dakika tutulur ve oda sıcaklığına soğutulur. -Kitin örnek aktarma bölgesine 160 μL (Pastör pipeti ile 5 damla) ilave edilir, 20 dakika beklenip sonuç kontrol edilir. Kitin “C” (kontrol) penceresinde kırmızı şerit oluşmalıdır. Bu, çizgi kitin doğru çalıştığını kanıtlar. “T” (test) penceresinde kırmızı şerit meydana gelmiş olması test edilen kültürde -dolayısıyla test edilen gıdada- E. coli O157 serotipi olduğunu gösterir. Analize standart kültürel yöntemlerle devam edilir. -Test kiti, 20 dakikadan sonra değerlendirmeye alınmaz. -Değerlendirme sonrası, mikroorganizma gelişmesi olmayanlar ve Singlepath E. coli O157 test sonucu negatif olan kitler de dâhil olmak üzere inkübatörden çıkan ve kullanılmış tüm malzeme sterilize edildikten sonra yıkanır/ atılır. A09 Verotoksin Belirlenmesi E. coli O157 ya da diğer patojenik E. coli serotipleri içinde EHEC olarak gruplandırılanlar en tehlikeli olanlardır. Bunlar, VT1 ve VT2 olarak adlandırılan 2 verotoksinden biri ya da her ikisini de üretirler. Serotipin ne olduğunun (örneğin H7 olup olmadığının) belirlenmesi yerine, doğrudan verotoksin oluşturup oluşturmadığının belirlenmesi halk sağlığı açısından çok daha önemlidir. Amaç, standart şekilde izole edilmiş tipik koloninin VT1 ve/veya VT2 oluşturup oluşturmadığının belirlenmesidir. Standart şekilde analiz ile elde edilmiş tipik E. coli O157 kolonilerine uygulanır. Sadece bir koloni için uygulanabileceği gibi, tipik 4-5 koloni bir arada da incelenebilir. Bu koşulda analiz daha ekonomik şekilde yapılmış olur. Aynı gıda örneğinden gelen 4-5 koloni beraberce analiz yapıldığında sonuç pozitif çıkarsa, analiz edilen gıdada verotoksin pozitif EHEC suşu ya da suşları bulunduğuna karar verilir. Tipik bir koloninin VT1 ve/ veya VT2 oluşturup oluşturmadığı 7 saatten biraz daha kısa bir süre içinde belirlenir. Kullanılan Malzeme CAYE Broth Base (Merck 1.00060) CAYE Supplement (Carbadox; Merck 1.00051) Duopath Verotoxins (Merck 1.04144) Polymyxin B Sulfate (Merck 1.09875)
-Standart yöntemle CT-SMAC Agar besiyerinden elde edilen tipik morfolojiye sahip bir ya da birkaç koloni, 1 mL CAYE Broth+CAYE Supplement besiyerinde homojenize edilir ve 37 o C’da 6 saat inkübasyona bırakılır. -Buradan alınan 180 µL kültür Eppendorf tüpüne aktarılıp, üzerine 20 µL polymyxin çözeltisi ilave edilir (Polymyxin çözeltisi: 5 mg Polymyxin B sulfate 1 mL damıtık suda çözülür). 35-37 o C’da 10 dakika inkübe edilir ve oda sıcaklığına soğutulur. Polimiksin, oluşan verotoksinlerin ortama salgılanmasını sağlar. -Eppendorf tüpü tüp karıştırıcıda yavaşça karıştırılır ve buradan 160 µL (Pastör pipeti ile 5 damla) alınıp, test kitinin örnek gözüne aktarılır. 20 dakika içinde “C” kontrol penceresinde kırmızı şerit görülmelidir. VT1 ve VT2 olarak gösterilen test pencerelerinde kırmızı şerit oluşması test edilen kolonilerden en az birisinde (diğer bir deyiş ile örnekte) sırası ile VT1 ve/ veya VT2 üreten bakterinin bulunduğunu gösterir. VT1 ve VT2’nin ayrı pencerelerde izlenmesi bu toksinlerden biri ya da ikisinin oluşturulduğunu gösterir. -Değerlendirme sonrası, mikroorganizma gelişmesi olmayanlar ve Duopath Verotoxins test sonucu negatif olan kitler de dâhil olmak üzere inkübatörden çıkan ve kullanılmış tüm malzeme sterilize edildikten sonra yıkanır/ atılır.
poşeti açıldıktan sonra 30 dakika içinde kullanılmalıdır.
Salmonella Analizi (Var/ Yok Testi; ISO 6579-2002) 25 g (mL) gıda, 225 mL TPS (Merck 1.07228) ile homojenize edilir. Homojenizat 35-37 ºC'da 16-20 saat inkübasyona bırakılır. İnkübasyondan sonra selektif zenginleştirme besiyerlerine ekim yapılır. Selektif zenginleştirmede 10 mL RVS Broth'a ön zenginleştirme kültüründen 0,1 mL eklenir ve inkübasyon 41,5±1 °C'da 24±3 saat olarak yapılır. Paralel olarak 10 mL MKTTn Broth'a ön zenginleştirme kültüründen 1 mL eklenir ve inkübasyon 37±1 °C'da 24±3 saat olarak yapılır. İnkübasyondan sonra her 2 selektif zenginleştirme kültüründen biri XLD Agar, diğeri kullanıcının tercihine bırakılan bir selektif katı besiyerine öze ile ayrı ayrı sürme yapılır. XLD Agar, 37±1 °C'da 24±3 saat olarak inkübasyona bırakılır. Diğer selektif katı besiyerinin inkübasyonu için Merck Microbiology Manuel'e başvurulmalıdır. Petri kutuları 37 ºC'da 24 saat inkübasyona bırakılır. Salmonella, XLD Agar besiyerinde renksiz (besiyeri ile aynı renkte; kırmızı) ve siyah merkezli koloniler oluşturur. Tipik koloniler ayrı ayrı olmak üzere Triple Sugar Iron (TSI) Agar, Urea Broth ve Lysine Iron Agar besiyerinde tanımlanır. İlave biyokimyasal testler yapılması da önerilmektedir. Çalışma serolojik esaslı testler ile bitirilir. Singlepath Salmonella bu amaçla kullanılmaktadır. Çalışmada kullanılan bütün malzeme otoklavlandıktan sonra yıkanır/atılır. A10 A10 Salmonella Analizi (Var/ Yok Testi; ISO 6579-2002) 25 g (mL) gıda örneğinde Salmonella, selektif olmayan besiyerinde ön zenginleştirme, 2 farklı besiyerinde selektif zenginleştirme, 2 farklı selektif katı besiyerine sürme ve tipik kolonilerin biyokimyasal ve serolojik testlerle doğrulanması olan standart var/ yok yöntemiyle analiz edilir. Ürün çeşidine göre ön zenginleştirme besiyerinde çeşitli modifikasyonlar yapılabilmektedir.
Tamponlanmış Peptonlu Su (Merck 1.07228) Muller-Kauffmann Tetrathionate- Novobiocin (MKTTn) Broth; (Merck 1.05878) Rappaport Vassiliadis Soy (RVS) Broth (Merck 1.07700) Xylose Lysine Deoxycholate (XLD) Agar (Merck 1.05287) Brilliant Green Phenol Red Lactose Sucrose Agar (Merck 1.10747) Rambach Agar (Merck 1.07500) XLT4 Agar (Merck 1.13919) XLT4 Supplement (Merck 1.08981) Triple Sugar Iron Agar (Merck 1.03915) Urea Broth (Merck 1.08483) Lysine Iron Agar (Merck 1.11640) Singlepath Salmonella (Merck 1.04140)
-Gıda örneği, mikrobiyolojik analiz kurallarına uyularak laboratuvara getirilir. Homojenizasyonda blender ya da stomacher kullanılacaksa 25 gram katı gıda 225 mL Tamponlanmış Peptonlu Su besiyeri içinde homojenize edilir. 25 mL sıvı gıda doğrudan bu besiyerine eklenir. -Homojenizat, selektif olmayan ön zenginleştirme amacı ile 37±1 o C’da 18 saat süre ile inkübasyona bırakılır. -İnkübasyondan sonra selektif zenginleştirme besiyerlerine ekim yapılır. Selektif zenginleştirmede 10 mL RVS Broth’a ön zenginleştirme kültüründen 0,1 mL eklenir ve inkübasyon 41,5±1 o C’da 24±3 saat olarak yapılır. Paralel olarak 10 mL MKTTn Broth'a ön zenginleştirme kültüründen 1 mL eklenir ve inkübasyon 37±1
o C’da 24±3 saat olarak yapılır. -İnkübasyondan sonra her 2 selektif zenginleştirme kültüründen biri XLD Agar, diğeri kullanıcının tercihine bırakılan bir selektif katı besiyerine öze ile ayrı ayrı sürme yapılır. XLD Agar, 37±1 o C’da 24±3 saat olarak inkübasyona bırakılır. Diğer selektif katı besiyerinin inkübasyonu için Merck Microbiology Manuel'e başvurulmalıdır. -Salmonella, XLD Agar besiyerinde renksiz (besiyeri ile aynı renkte; kırmızı) ve siyah merkezli koloniler oluşturur. Diğer selektif katı besiyerinde tipik Salmonella koloni morfolojisi için Merck Microbiology Manuel’e başvurulmalıdır. -Her besiyerinden en az 1 adet tipik koloni alınıp tekrar XLD Agara sürülerek koloni morfolojisi doğrulanır. Tipik koloni yoksa, her besiyerinden 5 koloninin XLD Agara sürülmesi önerilmektedir. -XLD Agar, 37±1 o C’da 24±3 saat olarak inkübasyona bırakılır. Bu süre sonunda oluşan tipik koloniler ayrı ayrı olmak üzere Triple Sugar Iron (TSI) Agar, Urea Broth ve Lysine Iron Agar besiyerinde tanımlanır. İlave biyokimyasal testler yapılması da önerilmektedir. Çalışma serolojik esaslı testler ile bitirilir. Singlepath Salmonella bu amaçla kullanılmaktadır. -Selektif katı besiyerlerinden herhangi birisinden izole edilen kolonilerden 1 adedi dahi Salmonella olarak tanımlanırsa “analiz edilen 25 g (mL) gıdada Salmonella vardır” şeklinde rapor verilir. -Değerlendirme sonrası, mikroorganizma gelişmesi olmayanlar da dahil olmak üzere inkübatörden çıkan tüm malzeme sterilize edildikten sonra yıkanır/atılır.
25 g (mL) gıda 225 mL TPS (Merk 1.07228) besiyerine ilave edilir. Gerekirse homojenizasyon yapılır. ® Singlepath Salmonella Kiti ile Hızlı Tayin A11 A11 Singlepath Salmonella Kiti ile Hızlı Tayin Salmonella, yeryüzünde en fazla sayıda hastalık ve ölümlere yol açan gıda kaynaklı patojenlerden birisidir. Standart kültürel yöntemlerle analizi 4-5 gün sürmektedir. Singlepath Salmonella kiti kullanılarak, selektif zenginleştirme sonrasında Salmonella varlığı ya da yokluğu belirlenebilir.
poşeti açıldıktan sonra 30 dakika içinde kullanılmalıdır. Kullanılan Malzeme Tamponlanmış Peptonlu Su (Merck 1.07228) Rappaport Vassiliadis Soy Broth (Merck 1.07700) Singlepath Salmonella (Merck 1.04140) Analiz Gıda örneği, mikrobiyolojik analiz kurallarına uyularak laboratuvara getirilir. Homojenizasyonda blender ya da stomacher kullanılacaksa 25 gram katı gıda 225 mL Tamponlanmış Peptonlu Su besiyeri içinde homojenize edilir. 25 mL sıvı gıda doğrudan bu besiyerine eklenir. -Homojenizat, selektif olmayan ön zenginleştirme amacı ile 37±1 o C’da 18 saat süre ile inkübasyona bırakılır. -İnkübasyondan sonra 10 mL RVS Broth’a ön zenginleştirme kültüründen 0,1 mL eklenir ve inkübasyon 41,5±1 o
-İnkübasyon bitiminde bu kültürden uygun bir tüpe (tercihen polipropilen) 1-2 mL alınıp, kaynar su banyosunda 15 dakika tutulur ve oda sıcaklığına geldiğinde 160 mL (Pastör pipeti ile 5 damla) Singlepath Salmonella kitine uygulanır. 20 dakika sonunda kontrol "C" penceresinde kırmızı şerit oluşmalıdır. Bu, çizgi kitin doğru çalıştığını kanıtlar. Test "T" penceresinde de kırmızı şerit görülmesi analiz edilen kültürde, dolayısı ile gıdada Salmonella olduğunu gösterir. Pozitif sonuç alındığında standart bir katı besiyerine sürme yapılıp sonucun doğrulanması önerilir. Tersine olarak, bu test kiti ile negatif sonuç alınırsa analize devam etmenin gereği yoktur. Bu yöntemde toplam analiz süresi 42 saat 35 dakikadır. -Değerlendirme sonrası, mikroorganizma gelişmesi olmayanlar ve Singlepath Salmonella test sonucu negatif olan kitler de dâhil olmak üzere inkübatörden çıkan ve kullanılmış tüm malzeme sterilize edildikten sonra yıkanır/ atılır. Listeria monocytogenes Analizi (Var/ Yok Testi) 25 g (mL) gıda, 225 mL 1/2 Fraser Broth (Merck 1.10398 ve Merck 1.10399) ile homojenize edilir. Homojenizat 30 ºC'da 24 saat inkübe edilir. Gıdadaki Listeria'nın hasar görmüş olduğu düşünülüyorsa selektif katkısı ilave edilmemiş Fraser Broth besiyerinde homojenize edilip, 30 ºC'da 4 saat kendi halinde bırakılır. Daha sonra selektif katkı ilave edilip aynı sıcaklıkta 20 saat daha inkübe edilir. Tam kuvvette Fraser Broth 35-37 ºC'da 48 saat, PALCAM ve Oxford Agar 35-37 ºC'da 24 saat inkübe edilir. Tam kuvvette Fraser Broth besiyerinden 24 ve 48 saatlerde aynı besiyerlerine sürme yapılır. 1/2 Fraser Broth besiyerinden yapılmış ilk Petri kutuları değerlendirilir. Chromocult Listeria Selective Agar acc. OTTAVIANI and AGOSTI besiyerinde mavi-yeşil renkli, opak haleli koloniler Listeria monocytogenes olarak değerlendirilir. PALCAM Agar'da 1,5-2 mm çapında, zeytin yeşili gri renkli, bazen siyah merkezli ancak her zaman siyah zonlu, Oxford Agar'da ise 2-3 mm çapında, siyahımsı yeşil kahverengi, siyah zonlu, çökük merkezlidir. Tipik kolonilere hemoliz, CAMP testi, ramnoz ve ksiloz testleri yapılır, Singlepath Listeria da kullanılabilir. Kullanılmış tüm malzeme otoklavlandıktan sonra yıkanır/atılır. 30 °C'da toplam 24 saat inkübasyondan sonra biri "Chromocult Listeria Selective Agar acc. OTTAVIANI and AGOSTI" ile diğeri kullanıcının tercihine bırakılmış bir başka selektif katı besiyerine (Oxford Agar veya PALCAM Agar) sürme yapılır, paralel olarak bu ön zenginleştirme kültüründen selektif katkıları tam konsantrasyonda ilave edilmiş 10 mL Fraser Broth'a 0,1 mL ilave edilir. Bu besiyeri 35-37 °C'da 48 saat inkübe edilir. İnkübasyonun 24 ve 48. saatlerinde biri "Chromocult Listeria Selective Agar acc. OTTAVIANI and AGOSTI" ile diğeri kullanıcının tercihine bırakılmış bir başka selektif katı besiyerine (Oxford Agar veya PALCAM Agar) sürme yapılır.
Yüklə 235,92 Kb. Dostları ilə paylaş:
|