Amaliy mashg’ulot 2

Suv bilan to'yingan xloroformni tayyorlash
100 ml xloroformni 20 ml deionizatsiyalangan suv bilan aralashtirib, to'yinganligi uchun 24 soatga qoldiring. 4 dan 5 darajagacha bo'lgan haroratda saqlash muddati - 6 oydan oshmasligi kerak.
Etil spirtining 70% li eritmasini tayyorlash
70 ml 96% rektifikatsiyalangan etil spirtini 26 ml deionlangan suv bilan aralashtiring. 4 dan 5 darajagacha bo'lgan haroratda saqlash muddati - 2 oydan oshmasligi kerak.
BSA eritmasini tayyorlash (20 mkg/ml)
0,002 g quruq qoramol zardobi albuminini 1 ml deionlangan suvda eritib oling, olingan eritmaning 10 mklni 990 mkl deionizatsiyalangan suv bilan aralashtiring.
Muzlatgichda minus 20 daraja haroratda saqlash muddati - 6 oydan oshmasligi kerak.
Lizis buferini tayyorlash (2% "CTAB")
0,5 g geksadesiltrimetilammoniy bromidni 10 ml deionizatsiyalangan suvda eritib (yomon erigan bo‘lsa, suv hammomida qizdiring), 2,5 ml 1M Tris-HCl, 7 ml 5M NaCl, 1 ml 0,5M EDTA qo‘shing, soling. deionizatsiyalangan suv bilan eritmaning hajmi 25 ml ga, aralashtiriladi.
Yaroqlilik muddati 4 dan 5 darajagacha bo'lgan haroratda - 6 oydan ortiq bo'lmagan, cho'kma qabul qilinadi.
Ishlatishdan oldin eritma xona haroratida saqlanadi yoki cho'kma to'liq eriguncha termostatda 65 daraja haroratda isitiladi.
Ishlatishdan oldin darhol merkaptoetanol tayyorlangan liziz tamponiga 4 kub miqdorida qo'shiladi. 1 kub uchun mm. lizis buferini ko'ring va aralashtiring.
Elektroforezni bajarishda quyidagi tamponlardan birini qo'llang.
1x TBE elektroforez buferini tayyorlash
1000 ml hajmli o‘lchov kolbasida 10,8 g Tris (gidroksimetil) aminometan, 5,5 g borik kislota va 0,92 g etilendiamintetraasetik eritiladi.
kislota, distillangan suv bilan belgigacha suyultiriladi, to'liq eriguncha aralashtiriladi. 1x eritmaning saqlash muddati 10 kun, odatda 10x tayyorlanadi va ishlatishdan oldin 1x gacha suyultiriladi, maksimal uch marta ishlatiladi.
1x TAE elektroforez buferini tayyorlash
1000 ml o'lchov kolbasiga 242 g Tris asosi, 57,1 ml muz sirka kislotasi, 10 ml 0,5 M EDTA qo'shing, belgigacha deionlangan suv bilan to'ldiring. Olingan 50x eritmani ishlatishdan oldin 50 marta suyultiriladi. Elektroforez uchun ikki martadan ko'p bo'lmagan foydalaning.