Amaliy mashg’ulot 2

Amaliy mashg’ulot 2

Mavzu: DNK ajratish, PZR hamda gel-laktroforez usullarini bajarishda ishlatiladigan eritmalarni tayyorlash
Mashg’ulotning maqsadi: O‘simlik to‘qimalaridan genomik DNKni ajratib olish uchun eritmalar tayyorlash o‘rgatiladi.
Kerakli asbob-uskunalar: Sterilizator, pH-metr, genom DNK ajratish uchun asboblar (laminar, kontsentrator, vorteks, tsentrifuga, suv hammomi, termostat, gorizontal blokli gel-elektroforez jihozlari, dozatorlar, probirkalar), rezina qo’lqoplari..
Amaliy mashg’ulot bajarishda rioya qilinadigan texnika xavfsizlik qoidalari: Mashg’ulotlarni bajaruvchi hamma talabalar texnika xavfsizligi bo’yicha yo’riqnoma talablari bilan tanishtirilgan bo’lishlari lozim. Shuningdek talaba o’qituvchi yoki laborantning ruxsatisiz turli moddalarni, asbob-uskunalarni o’zboshimchalik bilan ishlatishi mumkin emas.
Ishning bajarilishi. Eritmalarni tayyorlash tartibi quyidagicha amalga oshiriladi.
1M Tris - HCl ni tayyorlash (pH 7,5)
100 ml hajmli o'lchov kolbasida 12,11 g Tris (gidroksimetil) aminometan (molekulyar og'irligi 121) 80 ml distillangan suvda eritiladi, konsentrlangan xlorid kislotasi bilan pH ni 7,5 ga sozlang, so'ngra eritma hajmini deionizatsiyalangan eritma bilan belgiga keltiring. suv, aralashtiriladi, bir yildan ortiq bo'lmagan -20 C haroratda saqlanadi.
5M NaCl ni tayyorlash
29,22 g natriy xlorid (molekulyar massasi 58,5) 100 ml distillangan suvda eritiladi, aralashtiriladi, tiqinli shisha idishda xona haroratida 1 yilgacha saqlanadi.
30% li NaOH ni tayyorlash
7 ml distillangan suvda 3 g natriy gidroksid (molekulyar massasi 40) eritiladi.
0,5M EDTA tayyorlash (pH 8,0)
100 ml hajmli o‘lchov kolbasida 18,62 g etilendiamintetrasirka kislotasi (molekulyar massasi 372,2) 80 ml distillangan suvda eritiladi. 30% natriy gidroksid eritmasi bilan eritmaning pH qiymatini 8,0 ga, distillangan suv bilan - eritma hajmini belgiga keltiring, aralashtiring. Xona haroratida tiqinli shisha idishda 1 yilgacha saqlang.
Tayyorlangan eritmalar 1 atm., 121 °C haroratda 15 - 20 daqiqa davomida avtoklavlanadi.