Klinik Biyokimya Uygulamalarında HPLC Aplikasyonları Plazma ve serum örneklerinde Vitamin C (L-Askorbik Asit) teşhis ve miktarlandırılması için HPLC siteminde UV (Ultra-viyole) dedektörle yapılan aplikasyon çalışmasıdır;
(Shimadzu Prominence HPLC-UV Sistemleri ile geliştirilmiştir.) İçerik:
Sağlıklı bir gelişim, diş, kemik ve deri için vazgeçilmez bir bileşen olan C vitamini olarak da adlandırılan L-askorbik asit (3-keto-L-gulofuranolaktan); demirin absorblanması, kolajen sentezi, kan damarlarının yapısal gücünün sürdürülmesi, bazı aminoasitlerin metabolizmasında ve adrenal bezlerin hormon sentezi ve salgılaması gibi metabolik fonksiyonlarda görev alan karbonhidrat benzeri bir kimyasal maddedir.
C vitamini, vücudun pek çok yerinde uygun gelişim ve işlev için gereklidir. Aynı zamanda uygun bağışıklık fonksiyonu sürdürülmesinde önemli bir rol oynar.
Beklenen Değerler:
0.6-2.0 mg/dL
HPLC Metot Parametreleri:
HPLC-UV Parametreleri
Kolon
DİKMA-inspire C18-(150*4,6, 5um)
Enjeksiyon Hacmi
25 µL
Gradient
00.00 dk 100% A
08:00 dk 100% A
Akış
1,0 mL/dk
Kolon Fırını
30 C
Dedektör
UV- 243 nm
Analitik performans verileri :
Analit
LOQ (ug/L)
Doğruluk (%)
Kesinlik (%CV)
Doğrusallık
(R2)
Vitamin C
50
99,85
1,20
0,9995
Numune Hazırlama Prosedürü:
100 uL plazma veya serum numunesi numune hazırlık tüpüne alınır.
100 uL Reaktif 1 eklenir ve 30 sn vorteks karıştırıcı ile karıştırılır.
+4 C’de 10 dakika inkübasyona bırakılır.
10000 x rpm’de 10 dakika santrifüj edilir.
Üst faz bir oto örnekleyici vialine alınır.
HPLC sistemine 25 uL enjeksiyon verilir.
Spike Yapılmış plazma örneğinde Vitmin C (L-Askorbik Asit) analizi örnek kromatogramı
