Microsoft Word M115R1 5060184000284 tr doc
Yüklə 189,27 Kb. Pdf görüntüsü
|
|
1
Barbiturates (Oral Fluid)
Cozart Bioscience Ltd.
Barbituratlar
Oral Sıvı Uygulaması Cozart RapiScan Toplayıcısı
M115R1 (Haziran 2003)
Amaçlanan Kullanım Oral Sıvı için Cozart Bioscience Barbituratlar EIA seti klinik ve adli laboratuarlarda kullanım için Cozart RapiScan Oral Sıvı toplama sistemiyle birlikte kullanılmak üzeredir. Bu toplama sistemiyle 20 ng/mL’lik kesme konsantrasyonunda insan ağzı sıvısındaki Barbituratlar takibi için niteliksel sonuçlar sağlar. Toplama sistemi örneğin 1:3’lük seyreltilmesini içerdiğinden, bu seyreltilmemiş insan ağzı sıvısındaki 60 ng/mL’ye eşittir.eşittir.
Bu belgenin geri kalanı 20 ng/mL’lik kesme konsantrasyonundan bahsedecektir.
Bu tahlil sadece bir ön analitik test sonucu sağlar. Test sonuçlarını, özellikle de pozitif bir ön sonuç alacak şekilde, istismar eden bütün ilaçlar hakkında klinik değerlendirme ve profesyonel yargıya başvurulmalıdır. Daha kesin bir analitik sonuç elde etmek için daha özel bir kimyasal metot alternatifi kullanılmalıdır. Gaz kromatografisi/kütle spektrometrisi (GC-MS) tercih edilen kesinleştirme yöntemidir.
Bu ürünün işyeri testi için gerekli kriterleri sağladığını belirlemek organizasyonların sorumluluğudur.
Testin Prensibi
Oral Sıvı için Cozart Bioscience Barbituratlar EIA seti insan ağzı sıvısındaki barbituratların tespiti için rekabetçi bir enzim immunotahlilidir. Mikrotitre şeritlerinin çukurları anti-Barbiturat antikorlarıyla kaplıdır. İlk kuluçka sırasında yaban turpu peroksidazıyla (HRP) etiketlenmiş Barbituratlar, mikrotitre şeritlerindeki anti- Barbiturat antikorlarının bağlanma yerleri için hasta örneğindeki serbest Barbituratlar ile yarışır. TMB substrat çözeltisinin eklenmesinden önce çukurlar fazla enzim materyalinin kaldırılması için yıkanır. Durdurma çözeltisinin eklenmesi tepkimeyi durdurur ve soğurganlıklar spektrofotometresel olarak 450 nm'de okunur.
2
Barbiturates (Oral Fluid)
Cozart Bioscience Ltd.
Reaktif Maddeler
M115R1- 1 tabaklı set Anti-Barbiturat Kaplı Levha- (1 levha) Kırılmaya hazır 12 x 8 çukur şerit. Kuru formdaki polistiren levha üzerinde sabitlenmiş anti- Barbituratlar koyun çok klon antikorları. Serbest BSE kaynağından elde edilen BSA 0.001% içerir.
Enzim Eşleniği – (15 mL) Yaban turpu peroksidazıyla <0.1% (v/v) etiketlenmiş ve protein matriste dengeleyicilerle seyreltilmiş Barbiturat türevi. Koruyucular içerir.
Yıkama Tampon Çözeltisi – (50 mL) 30 x konsantre, 0.1% (v/v) yüzey etkin madde. Kullanımdan önce her şişeyi 1500 mL’ye kadar saf suyla seyreltin.
Substrat Çözeltisi—(20 mL) <0.05% 3,3’, 5,5’- tetramethylbenzidine içeren bir şişe.
Durdurma Çözeltisi—(20 mL) 1 mol/L sülfürik asit içeren bir şişe. Bu çözeltiyi aşındırıcı olarak kullanın.
Negatif Kalibratör – (1 mL) Barbituratlar için negatif oral sıvı matrisi.
Pozitif Kalibratörler – (bütün seviyelerde 1 mL) 5 ng/mL Barbiturat içeren oral sıvı matrisi. 20 ng/mL Barbiturat içeren oral sıvı matrisi. 100 ng/mL Barbiturat içeren oral sıvı matrisi.
Reaktiflerin Saklanması ve Kararlılığı Açılmış/ açılmamış bütün reaktifleri 2-8°C sıcaklıkta saklayınız. Reaktifler, reaktif etiketleri üzerinde belirtilen son kullanma tarihlerine kadar kararlıdır.
Mikrotitre şeritlerinin fazlası hemen kurutuculu mühürlenebilir folyo keseyle yeniden paketlenmelidir.
Saklama koşullarını yerine getirme konusunda başarısızlık tahlil performansını olumsuz etkileyebilir.
Saklama halinde yıkama tamponunda kristaller oluşabilir. Yıkama tamponunu seyreltirken bütün bunların transfer edildiğinden emin olun.
Substratın rengi berrak olmalıdır. Herhangi bir mavi renklenme reaktifin kirlendiğini ve atılması gerektiğini gösterir. Substratı ışığa maruz bırakmayınız.
Herhangi bir set bileşeninde bulanıklık veya çökelme, bozulmaya işaret eder ve bileşen atılmalıdır. 3
Barbiturates (Oral Fluid)
Cozart Bioscience Ltd.
Örnek Toplanması ve Saklanması
Lütfen Cozart RapiScan Toplayıcısıyla örnek toplama prosedürünü anlatan talimatlara (CD101) başvurunuz. Örnek hemen analiz edilemezse, 28 güne kadar 2-8°C sıcaklıkta veya daha uzun süre için -20°C sıcaklıkta saklayınız. Örneğin kirlenmesinden şüpheleniliyorsa yeni bir örnek elde ediniz.
Oral sıvı örneğinin toplanmasından önce yiyecek veya içecek tükettiğinizde 10 dakika bekleyiniz.
Bütün örnekleri potansiyel olarak enfekte olabileceklerini düşünerek kullanınız.
Uyarılar ve Önlemler
1. Set reaktifleri civarında yiyecek ve içeceklerin bulundurulması tavsiye edilmez. 2. Bütün deri şikayetleri, kesikler ve yıpranmalar uygun şekilde korunmalıdır. 3.
Kalibratörler sentetik oral sıvı kullanılarak hazırlanmıştır. Ancak, kalibratörler ve bütün oral sıvı örnekleri potansiyel olarak enfekte oldukları düşünülerek kullanılmalıdır. 4. Bazı tahlil reaktifleri bakır veya kurşun boru tesisatlarıyla reaksiyona girerek potansiyel olarak patlayıcı metal azidleri oluşturabilecek olan sodyum azid içerir. Bu reaktifleri elden çıkarırken azid birikmesini önlemek için her zaman büyük miktarda suyla yıkayınız. 5.
Pipet reaktifleri ağzınıza almayınız. 6.
Sodyum azidi örneklere koruyucu olarak eklemeyiniz. 7.
Mikrobik kirlenmeleri önlemek için bütün kapları kullanılmadıkları zaman kapalı tutunuz. 8. Reaktifleri son kullanım tarihlerinden sonra kullanmayınız. 9.
Farklı setlerden, üreticilerden veya parti numaralarından reaktifleri karıştırmayınız. 10. Reaktifleri dondurmayınız. 11. Reaktiflerin mümkün olduğu kadar doğrudan günışığından uzak tutulması tavsiye edilir.
12. Durdurma Çözeltisi aşındırıcıdır; özenle kullanınız. 13.
Örnek eklenmesi 30 dakikadan fazla sürmemelidir.
Prosedür
Tahlil Prosedürü
Yıkama Tamponunu 1:30 oranında saf suyla seyrelterek hazırlayınız. Not:
Kullanımdan önce bütün reaktifleri oda sıcaklığına (20-27°C ) getiriniz. Operatörün takdir yetkisine bağlı olarak bütün örnekler, kalibratörler ve kontroller kopyalarıyla test edilebilir.
1. Her çukura örneğin, kalibratörün veya kontrolün 10 µL’sini ekleyiniz. (Yukarıdaki not 13’e bakınız.)
2. Her test çukuruna 100 µL Enzim Eşleniği ekleyiniz. 3. 30
dakikalığına kuluçkaya yatırınız.
4. Levhayı levha yıkayıcısını kullanarak 350 µL Yıkama Tampon Çözeltisiyle dört kere yıkayınız.
5. Her çukura 100 µL Substrat Çözeltisi ekleyiniz ve 30 dakikalığına kuluçkaya yatırınız.
6. Her çukura 100 µL Durdurma Çözeltisi ekleyiniz. 7. 450 nm’de 15 dakikadaki soğurganlığı ölçün.
Gerekli Olan ama Sağlanmayan Materyaller
1. Pozitif ve negatif kontroller. 2.
450nm filtreli otomatik mikrotitre levhası okuyucusu. 3.
Tek kullanımlık uçlu hassasiyet pipetleri. Kirlenmeyi önlemek için her reaktif için temiz uçlar kullanınız. 4. Otomatik mikrotitre levhası yıkama makinası, manuel mikrotitre levhası yıkayıcı veya seyreltilmiş yıkama tamponu çözeltisini dağıtmak için 350 μL sekiz kanallı pipet.
5. 30 dakikalık süreleri tutmak için süre ölçer. 6. Yıkama tamponu konsantresinin seyreltilmesi için temiz ölçme silindiri. 7.
Saf veya iyonsuzlaştırılmış su.
Kalite Kontrol
Her tahlilde kalibratörler dahil edilmelidir. Durdurulmuş tahlil 15 dakika içinde okunmalıdır.
Kontroller setle birlikte sağlanmamıştır ama kullanıcılar dış kalite kontrollerin uygulanmasıyla ilgili uygun kurallara uymalıdırlar. Negatif kontrol, 20ng/mL kalibratörden daha yüksek bir soğurganlığa sahip olmalıdır. Pozitif kontrol, 20ng/mL kalibratörden daha düşük bir soğurganlığa sahip 4
Barbiturates (Oral Fluid)
Cozart Bioscience Ltd. olmalıdır. Pozitif veya negatif kontroller sırasıyla 20ng/mL kalibratörden daha düşük veya yüksek soğurganlığa sahip değillerse, tahlil sonuçları geçersizdir. Tahlil tekrar edilmelidir, kontrol sonuçları hala yukarıda belirtilen limitlerin dışındaysa Cozart Bioscience Ltd.’in Teknik Servis’i ile temasa geçiniz.
Sonuçların Değerlendirilmesi
Pozitif Sonuç – 20ng/mL Kesme Kalibratörü’nden küçük veya ona eşit soğurganlığa sahip bütün örnekler pozitif olarak değerlendirilir.
Negatif Sonuç – 20ng/mL Kesme Kalibratörü’nden büyük soğurganlığa sahip bütün örnekler negatif olarak değerlendirilir.
Not:
Reaktiflerin saflığının bozulması, gerekli yeterliklere sahip olmayan enstrümanların kullanılması veya etiketteki talimatları takip etme konusundaki diğer başarısızlıklar, performans karakteristiklerini ve etikette belirtilen veya ima edilen iddialarını etkileyebilir.
Yetersizlikler
Bu tahlilden elde edilen pozitif sonuç GC/MS gibi başka bir genel olarak kabul gören bağışıklık harici metotla kesinleştirilmelidir. Test yalnızca insan oral sıvısıyla kullanılmak üzere tasarlanmıştır.
Burada listelenmemiş başka maddelerin ve/ya faktörlerin testle etkileşme ve teknik veya prosedürel hatalar gibi yanlış sonuçlar ortaya çıkarma ihtimali vardır.
Cihazın analitik performansında bozulma veya setin taşıma sırasında zarar görmesi durumunda lütfen Cozart Bioscience Ltd.’ın Teknik Servis’i ile temasa geçiniz.
Çok sayıda ilişkisiz ilaç 10,000 ng/mL'de test edilmiştir. Hiçbir çapraz tepkirlik gözlenmemiştir. Bu bileşiklerin tam listesi için lütfen teknik destekle bağlantıya geçiniz.
Tahlilden önce maddeler negatif oral sıvı örneği içinde hazırlanmıştır.
Her bir örneğin konsantrasyonunu tahmin etmek için dört kalibratör kullanılarak bir kalibrasyon eğrisi çizilmiştir.
Bileşik ng/mL Test edilen
Görünür Barbitur
at ng/mL
% Çapraz
Tepkirlik
Butalbital
10 0.3
3.2
100 21
21
1000
208
21
Pentobarbital
10 0.04 0.4
100 7.9 7.9 5
Barbiturates (Oral Fluid)
Cozart Bioscience Ltd.
1000 130 13
Bibliografi
1.
Urine Testing for Drug of Abuse. National Institute on Drug Abuse (NIDA) Research Monograph 73, 1986. 2.
Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs. National Institute on Drug Abuse. Federal Register Vol. 53, No 69 pp 11970 (1988). 3.
D.Simpson et al. Screening for drugs of abuse (II): cannabinoids, lysergic acid diethylamide, buprenorphine, barbiturates, benzodiazepines and other drugs. Ann Clin Biochem (1997); 34 : 460-510.
Daha fazla bilgi için: COZART Bioscience Ltd 45 Milton Park, Abingdon, Oxfordshire, OX14 4RU, UK. Telephone: +44 (0) 1235 861483 Fax: +44 (0) 1235 835607 www.cozart.co.uk
Yüklə 189,27 Kb. Dostları ilə paylaş:
|