10
DNKni parchalash o'rniga tanib olish ketma-ketligining
faqat bitta ipini gidroliz
qildi.R(1)subbirligidagi katalitik joy funksionalligicha qoladigan fermentlar ketma-
ketlikning
pastki
qatoriga
kirib,CCTCAGC/GC--TGAGG
hosil
qiladi,R(2)bo'linmasidagi katalitik joy funktsional bo'lib qolganlar esa CC--
TCAGC/GCTGAGG ni hosil qilib,yuqori ipni egallab oldilar.Ushbu DNK-nicking
fermentlari
DNKni
ta'mirlash,rekombinatsiya
va
replikatsiyani
o'rganish,shuningdek,DNKning
parchalanishi,sintezi va kuchaytirilishi kabi
niklardan boshlanadigan laboratoriya protseduralari uchun foydali bo'lishi mumkin.
Xulosa
BbvCI ko'rsatilganidek ,5′-CC↓TCAGC-3'/5'-GC↓TGAGG-3'
assimetrik
DNK ketma -ketligini ajratadi.Ko'pgina II turdagi cheklovchi fermentlar bir xil
bo'linmalardan iborat bo'lsa-da,BbvCI ikki xil bo'linmaga ega:R 1 ,GC↓TGAGG da
ta'sir qiladi;va CC↓TCAGC da harakat qiluvchi R 2 .R 1 − R 2 + yoki R 1 + R 2 −
yoki R 1 − R 2 + yoki R 1 + R 2 − bo‘linmalarida nuqsonlari bo‘lgan BbvCI ning
ba’zi mutantlari mahalliy bo‘linma tomonidan hujumga
uchragan faqat bitta ipni
ajratib oladi.Proteinning turli konsentrasiyalarida analitik ultratsentrifugalashda
yovvoyi tipdagi va mutant BbvCI fermentlari ko'p yig'ilgan,ammo R 1 R 2DNKning
parchalanish reaktsiyalarida ishlatiladigan konsentratsiyalarda geterodimerlar
Xulosa qilib aytadigan bo'lsak,Nt.BbvCInicking
DNK endonukleazasi
yordamida PCR qo'shimchalari bizning o'zgartirilgan vektorimizga yuqori
samaradorlik bilan yig'ilishi mumkin.An'anaviy
klonlash usullari bilan
solishtirganda,NiDE usuli bir qator afzalliklarga ega.Birinchidan,NiDE klonlash
usuli juda samarali.Ikkinchidan,bu vaqtni tejaydi,chunki konstruktsiyalar ~ 2-3 soat
ichida bajarilishi mumkin.Nihoyat,texnika kamroq
mehnat va xarajat talab
qiladi,chunki hazm qilingan vektor va insertni tozalash endi talab qilinmaydi.