6
faolligi ularning R(1)(+)R(2)(-)va R(1)(-)R(2)(+)mutantlar.Shunday qilib,BbvCI-
dagi har bir faol sayt boshqasiga ta'sir qiladi.Yovvoyi tipdagi reaktsiya paytida DNK
dastlab bitta zanjirda bo'linadi,asosan R (1)subbirligi tomonidan maqsad
qilingan.Ferment DNK dan ajralib chiqishidan oldin boshqa ip asta-sekin R
(2)tomonidan parchalanadi.Demak,niklangan shakl vaqtinchalik
oraliq mahsulot
sifatida to'planadi.Bu xatti-harakat ko'plab boshqa cheklash fermentlaridan farq
qiladi,ular ikkala ipni teng tezlikda kesib tashlaydi.Biroq,yovvoyi turdagi
fermentdagi R(1)(+)va R(2)(+)subbirliklarining faolligi ularning R(1)(+)R(2)(-)va
R(1)(-)R(2)(+)mutantlar.Shunday qilib,BbvCI-dagi har bir faol sayt boshqasiga
ta'sir qiladi.niklangan shakl vaqtinchalik oraliq mahsulot sifatida to'planadi.Bu
xatti-
harakat ko'plab boshqa cheklash fermentlaridan farq qiladi,ular ikkala ipni teng
tezlikda
kesib
tashlaydi.Biroq,yovvoyi
turdagi
fermentdagi
R(1)(+)va
R(2)(+)subbirliklarining
faolligi
ularning
R(1)(+)R(2)(-)va
R(1)(-
)R(2)(+)mutantlar.Shunday qilib,BbvCI-dagi har bir faol sayt boshqasiga ta'sir
qiladi.niklangan shakl vaqtinchalik oraliq mahsulot sifatida to'planadi.Bu xatti-
harakat ko'plab boshqa cheklash fermentlaridan farq qiladi,ular ikkala ipni teng
tezlikda
kesib
tashlaydi.Biroq,yovvoyi
turdagi
fermentdagi
R(1)(+)va
R(2)(+)subbirliklarining
faolligi
ularning
R(1)(+)R(2)(-)va
R(1)(-
)R(2)(+)mutantlar.Shunday qilib,BbvCI-dagi har bir faol sayt boshqasiga ta'sir
qiladi.
PalindromikDNK ketma-ketligini taniydigan II turdagi cheklovchi
endonukleazalarning ko'pchiligi bir xil bo'linmalarning dimerlaridir. Ular tanib olish
joylari bilan simmetrik tarzda o'zaro ta'sir qiladi.Bir oqsil bo'linmasi va DNK ketma-
ketligining yarmi o'rtasidagi kontaktlar odatda ikkinchi bo'linma tomonidan
DNKning ikkinchi yarmi bilan takrorlanadi.Dimerdagi ikkita faol joyning har biri
bitta ipni va Mg 2+ mavjud bo'lganda parchalanish uchun joylashtirilgan.,ular teng
stavkalarda harakat qilishadi.Ko'pgina hollarda fosfodiester bog'lanish
gidrolizi
tezligi konstantalari fermentning DNKdan ajralishidan tezroq bo'ladi,shuning uchun
ferment bitta bog'lanish hodisasi davomida ikkala ipni ham kesib tashlaydi.Shu
7
tarzda harakat qiluvchi fermentlar qatoriga EcoRI,EcoRV,MunI va BamHI.
kiradi.Boshqa tomondan,ayrim cheklovchi fermentlar tetramerlardir:ikkita boʻlinma
palindromik tanib olish ketma-ketligining bir nusxasini bogʻlaydi.nosimmetrik
dimer bilan bir xil tarzda va boshqa ikkita bo'linma ham ikkinchi
(uzoq)nusxada,shuning uchun oraliq DNKni aylanib chiqadi.ikkala ip ham ikkala
joyda.Keyingi hollarda,restriksion fermenti monomer sifatida tanib olish ketma-
ketligi bilan bog'lanadi,lekin keyin ikkala ipni
ajratish uchun dimerlanishi
kerak.bitta gen.Bir nechta istisnolardan tashqari,oligomerdagi har bir subbirlik DNK
substratidagi bitta fosfodiester bog'lanishining ajralishiga vositachilik qiladi.
BbvCIcheklash endonukleazasi assimetrik DNK ketma-ketligining ikkala
ipini ajratadi.
8
5′-C - C ↓ T - C - A - G - C -3′
3′- G - G - A - G - T ↑ C - G -5'
ko'rsatilgan pozitsiyalarda: bu ketma-ketlikning "yuqori" va "pastki" iplari
mos ravishda bo'linish nuqtasi,CC va GC oldidagi dinukleotid bosqichi bilan
belgilanadi.II turdagi cheklash tizimlari uchun me'yordan farqli o'laroq,BbvCI
endonukleaza alohida genlar tomonidan kodlangan ikki xil polipeptid,R 1 va R 2 ni
o'z ichiga oladi.19 R 1 ham,R 2 ham o'z-o'zidan faollikka ega emas va faol ferment
teng miqdorda R 1 va R 2 ni o'z ichiga oladi ,ammo ularning har birining soni hali
aniqlanmagan.R 1 ham ,R 2 hamOdatda cheklovchi nukleazalarning faol joylarida
topiladigan PD…EXK motiviga o'xshash aminokislotalar ketma-ketligini o'z ichiga
oladi.2,20 Bu ketma-ketlik ularning katalitik reaktsiyalari uchun zarur bo'lgan
magniy ionlari uchun bog'lanish joylarining bir qismini tashkil qiladi.21,22 Bu
ichidagi ba'zi mutatsiyalar R 1 subbirligidagi motiv R 1 - R 2 + fermentlarni hosil
qiladi,ular faqat tanib olish ketma-ketligining CC ipini ajratadi.19 Aksincha,R 2
subunitidagi ma'lum mutatsiyalar R 1 + R 2 - fermentlarni hosil qiladi,ular faqat GC
zanjirini
ajratadi.Demak,R
1
bo'linmasidagi faol joy
GC
ipini kesish uchun
mas'uldir va R da2 CC
ipi.
EcoRV
yoki
EcoRI kabi pravoslav
cheklovchi
fermentlar
yordamida
DNKning
ma'lum
bir
zanjirida
alohida
bo'linmaning
reaktsiyasini
kuzatish
mumkin emas,chunki bu
9
oqsillarning qaysi faol joyi DNKning qaysi zanjirini parchalashini aniqlab
bo'lmaydi.Palindromik ketma-ketlikda homodimerik oqsil bilan dimerning A
bo'linmasining yuqori ipda va B bo'linmasining pastki ipda ta'sir qilish ehtimoli
aksincha,A pastki qismida va B yuqorida.Hatto bitta bo'linmada mutatsiyaga
uchragan
dimerda ham,yovvoyi tipdagi bo'linma yuqori va pastki iplarni teng
ravishda ajratadi.23 Bundan farqli o'laroq,BbvCI hozirda DNKning belgilangan
zanjiridagi oligomerik oqsildagi har bir faol joyning reaktsiyasini kuzatish uchun
noyob imkoniyatni taqdim etadi.
Dostları ilə paylaş: