Shabalova I. P., Polonskaya N. Yu. Sitogik diagnostika klinik asoslari Nashr qilingan yili 2010 yil Mundarija

5.1 TAYYORLASH VA BO'YISH USULLARI


Sitologik tekshirish uchun material
1. Eksfoliativ material
Eroziya, yaralar, yaralar, oqmalar yuzalaridan sirlar, ajralishlar, oqindi va qirib tashlashlar,
balg'am, yuvish, ekssudatlar, transudatlar. U alohida o'rin tutadi profilaktik tekshiruvlar davomida olingan materialni sitologik tekshirish aholi. Eng keng tarqalgan va majburiy o'rganish hisoblanadi profilaktik ginekologik tekshiruvlar.
2. Teshilish materiali
O'smalardan nozik igna (nozik igna biopsiyasi) bilan olingan nuqtalar, o'simtaga o'xshash shakllanishlar, har qanday lokalizatsiya muhrlari: bosh, bo'yin, ko'krak, qalqonsimon bezlar, limfa tugunlari, suyaklar, oyoq-qo'llarning yumshoq to'qimalari, teri, o'pka, mediastin, qorin bo'shlig'i organlari va retroperitoneal bo'shliq.
• teri va shilliq pardalar - ta'sirlangan joylardan qirib tashlangan surtmalar, o'simta bilan -
nozik igna bilan teshilish;
• yumshoq to'qimalar, sut bezlari, limfa tugunlari, qalqonsimon bez - ponksiyon
ingichka igna;
• (qalqonsimon bez, o'pka, bo'yin o'smalari, jigar, taloq, buyrak, tuxumdon,
prostata va oshqozon osti bezi, retroperitoneal o'smalar). Ultratovush yoki rentgen tekshiruvi ostida ponksiyontadqiqot.
• sitologik tekshiruvdan o'tish kerak seroz bo'shliqning punktatlari, kistalar, sut bezining oqishi va boshqalar. Sitologik tekshirish uchun qovuq mahalliy foydalanish mumkin
siydik (sitologik diagnostika samaradorligi 40-50%), spirtli ichimliklarni yuvish
(sitologik diagnostika samaradorligi 60-65%), parchalardan smear-tasmalar
sistoskopiya paytida olingan o'smalar (sitologik diagnostika samaradorligi taxminan
90%). Keng qamrovli tadqiqotda sitologik diagnostika samaradorligi
taxminan 100% ni tashkil qiladi.
Laboratoriyaga keltirilgan materialdan smear tayyorlash texnikasi
Olingan material miqdori har doim ham tashxis qo'yish imkoniyatini aniqlamaydi,
ba'zan juda oz miqdordagi material sahnalashtirish uchun etarli
tashxis.
Ko'p miqdorda qon mavjudligi ko'pincha to'sqinlik qiladi. Agar mavjud bo'lsa
smearlarni imkon qadar tezroq qilish kerak, aks holda pıhtılaşma sodir bo'ladi va dan
pıhtılaşmış pıhtı smear qilish va tadqiqot o'tkazish juda qiyin. Material
oynaga qo'llaniladi va juda ehtiyotkorlik bilan surtishadi, chunki hujayralar juda zaif va
ko'p sonli vayron qilingan hujayralar mavjudligi to'g'ri tashxis qo'yishga xalaqit beradi.
Bo'yashdan oldin smearlarni oldindan mahkamlash talab qilinmaydi. Quritilganda
havo, smearlar bo'yoq bilan quyiladi - May-Grunvald fiksatori - 3 daqiqa davomida. Bo'yoqni to'kib tashlamasdan unga bir xil miqdorda distillangan suv qo'shiladi. Bir daqiqadan so'ng bo`yoq to`kib tashlanadi va tayyor bo'yoqning ishchi eritmasi quyiladi.
Romanovskiy-Giemsa (1 ml bo'yoq va pH 6,8 bo'lgan 4 ml distillangan suv) 5 daqiqa.
Ishchi eritmani tayyorlashdan oldin tayyor Romanovskiy-Giemsa bo'yog'i
filtr. Bo'yashdan keyin namunalar distillangan suv bilan yuviladi va
havoda quritilgan, vertikal ravishda maxsus tayyorlangan quritgichga o'rnatiladi.
Pappenheim bo'yash (modifikatsiya) Bo'yoqlar
1. May-Gruvalda 0,3%.
300 mg May-Gruvald bo'yoq kukuni 100 ml metil spirtida eritiladi.
Eritma 3 kun davomida pishib etiladi.
2. Azur II. 1,0 g kukun 1000 ml qaynoq suvda eritiladi.
3. Eozin K yoki Na. Eozin K tayyorlash uchun 1,0 g kukun olib, eritiladi 1000 ml qaynoq suv. Eozin Na olish uchun bir xil miqdorda 0,5 g kukun olinadi suv.
Bufer eritmasi
1. Bir o'rinbosar fosfat K yoki Na. 100 ml uchun 1,7 g tuz
distillangan suv.
2. Ikki almashtirilgan fosfat K yoki Na. 100 ml distillangan 1,7 g tuz
suv.
Eritmalarni muzlatgichda saqlash mumkin. PH 6,8-7,2 bo'lgan suvni olish uchun
1-probirkaning bir qismini va 2-probirkaning ikki qismini (10 ml 1-probirka va 20) aralashtirish kerak.
1 litr distillangan suv uchun ml 2-probirka).
Bo'yash jarayoni
1. Smearlarni (quritilgan) metanolda 3 daqiqaga mahkamlang.
2. Tarkibi eritmasida 10 daqiqa davomida bo'yash: 1 qism Maya Grunvald bo'yog'i 0,3% distillangan suvning 4 qismiga (pH 6,8-7,2).
3. Azure-eozin bilan bo'yashni 20 daqiqaga yakunlang:
• Azura eritmasi - 1 qism;
• eozin eritmasi - 1 qism;
• distillangan suv (pH 6,8-7,2) - 5 qism.
4. Bo'yoqni oqadigan suv bilan yuvib tashlang.
5. Smearlarni havo bilan quriting.
Leishman Dyes bo'yicha smearlarni bo'yash
1. Leyshmanning bo'yog'i.
1 litr metil spirtiga 2,5 g Leishmanning quruq bo'yog'i. Bo'yoq 3-4 kun ichida pishadi.
2. Azur.
1 litr distillangan suv uchun 1 g quruq azur bo'yoq. Bo'yoq 3-4 hafta ichida pishib etiladi.
3. Eozin.
1 litr distillangan suv uchun 1 g quruq bo'yoq eozin. Bo'yoq 3-4 hafta ichida pishib etiladi. harakat
binoni
1. Smearni havo bilan quriting.
2. Leyshmanni 3 daqiqa davomida bo'yoqqa botirib oling.
3. Musluk suvi bilan yuvib tashlang.
4. Ortiqcha suvni silkitib tashlang.
5. Preparatni o'z ichiga olgan bo'yoq bilan to'ldiring: azure - 40 ml; eozin - 30 ml; distillangan
suv - 70 ml.
Ishdan oldin bo'yoq tayyor!
Smears 30-40 daqiqa davomida bo'yalgan.
6. Musluk suvi bilan yuvib tashlang.
7. Havoda quriting yoki filtr qog'ozi bilan quriting.
N.G.ga ko'ra shoshilinch bo'yash. Alekseev
Yupqa surtmalar N.G. usuli bo'yicha bo'yaladi. Alekseeva
1. 35-40°C gacha qizdirilgan May-Grunvald eritmasida 30 soniya davomida mahkamlang.
2. Suv bilan yuvib tashlang.
3. 0,1% azur-eozin eritmasida (2:1 nisbatda) 2 daqiqa davomida bo'yaladi.
4. Suv bilan yuvib tashlang.
5. Suvni quriting.
Papanikolau bo'yash texnikasi Papanicolaou binoni uchun nam fiksatsiya talab qilinadi. surtish. Smear yig'ilgandan so'ng darhol ho'l bo'lganda, ulardan biri bilan o'rnatiladi
sanab o'tilgan usullar:
• maxsus aerozollar;
• tomchi fiksator;
• 96° spirtda (10-20 min);
• Nikiforov aralashmasida (30 min).
Bo'yash uchun markali bo'yoqlardan foydalanish yaxshidir
bo'yash texnikasi odatda qo'llaniladi
Shundan so'ng u havoda quritiladi.
Preparatni bo'yashdan keyin uni balzam bilan yopish kerak, buning uchun:
Glikogen (mukopolisaxaridlar) uchun bo'yash - PAS reaktsiyasi Reagentlari:
metil spirti (CH3OH); davriy kislota;
fuksin oltingugurt kislotasi uchun fuchsin asosiy;
1N HC1 eritmasi;
natriy sulfat (Na2S2O5);
faollashtirilgan uglerod;
gematoksilin;
K (mos ravishda NaJO3 va KJO3); kaliy alumi; limon kislotasi.
Reaktivlarni tayyorlash
1. 1N HC1 eritmasi: 1 litr hajmli o'lchov kolbasiga 82,5 ml konsentrlangan xlorid kislota (HC1) quying va belgigacha distillangan suv qo'shing. Muzlatgichda saqlanadi.
2. Shiff reaktivi: 1 g asosiy fuksin 200 ml distillangan suvda eritiladi. Bir necha daqiqa qaynatib oling. Eritmani 50 ° C gacha sovutib oling. Eritmani filtrlang.
20 ml 1N HC1 qo'shing. O'zingizni bosing. 1 g Na2S2O5 (natriy metabisulfit) qo'shiladi. Faollashtirilgan ko'mir qo'shing (rangsiz). Eritma rangsiz bo'lganda (birkunda), u foydalanishga tayyor.
Muzlatgichda saqlanadi.
3. Oltingugurtli suv. Ishga tayyorlanmoqda!
1 g Na2S2O5, 200 ml distillangan suv va 10 ml 1N HC1 aralashtiriladi.
4. Yod kislotasi. Ishga tayyorlanmoqda!
200 mg yod kislotasi va 40 ml distillangan suv aralashtiriladi
5. Erlix gematoksilini. Aralash: gematoksilin - 1 g; NaJO3 - 0,2 g; kaliy
alum - 50 g; limon kislotasi - 1 g; distillangan suv - 1
Bo'yoq qog'oz qopqog'i bilan qoplangan idishda tez-tez 15 kun davomida pishadi
tebranish. Yaxshi yopiq idishda saqlanganda, eritma mos bo'lib qoladi
uzoq vaqt davomida foydalaning
6. Xlorid spirti: 99 ml 70 ° C2H5OH va 1 ml konsentrlangan aralashtiriladi. HC1.
Reaktsiyaning borishi
1. Preparat 20 daqiqa davomida metanolda mahkamlanadi.
2. 15 daqiqa davomida oqadigan suv bilan yuvib tashlang.
3. Bir necha soniya davomida havoga tushirildi.
4. Distillangan suv bilan 20 daqiqa yuviladi.
Reaktsiya qiymati. Eng muhim reaktsiya gematologik hisoblanadi
leykemiya shaklini aniqlash uchun tadqiqotlar.
Peroksidazaning mavjudligi miyeloid hujayralarga xosdir, reaksiya mahsuloti
sariq-jigarrang. Miyeloid leykemiyada blastlarda reaksiya mahsuloti
granulalar sifatida aniqlanadi. Limfoblastik leykemiya bilan - yirik granulalar shaklida.
Peroksidaza reaktsiyasi antigen mahsulotini aniqlash uchun ham qo'llaniladi.
immunotsitokimyoviy reaktsiyalar paytida antikor.
Bo'yoqlarda bakteriyalarni bo'yash
Sitologik amaliyotda ko'pincha binoni va bo'yashga ehtiyoj bor bakteriyalar tadqiqoti. Bu ko'pincha bachadon bo'yni va boshqa organlardan smearlarga tegishli va to'qimalar, turli xil ekssudatlar. Smear turli usullar bilan tayyorlanadi. Bunday hollarda material suyuq bo'lganda, uning bir tomchisini toza shisha slaydga qo'ying va uni surting; boshqa shisha slaydning chetidan foydalanib (afzal jilolangan). Agar material juda bo'lsa qalin (masalan, yiringli), keyin u yoki sho'r suv bilan suyultiriladi va keyin birinchi holatda bo'lgani kabi harakat qiling yoki shisha slaydni yupqa qatlam bilan surting pastadir yoki shisha tayoq yordamida. Nihoyat, smearlarni tayyorlash mumkin nega toza shisha slayd to'g'ridan-to'g'ri seroz qopqoqqa qo'llaniladi, shilliq qavat yoki har qanday organning (to'qimalarning) yangi kesilgan yuzasiga suyuqlik tarkibining mavjudligi (ekssudat, siydik va boshqalar) santrifüj qilish tavsiya etiladi va cho'kindidan smearlarni tayyorlang. Yuqoridagi usullardan biri bilan olingan smearlar yaxshilab quritiladi va keyin quruq issiqlik bilan o'rnatiladi. Fiksatsiya zaif orqali erishiladi shisha slaydni isitish (taxminan 70 ° C), buning uchun uch marta amalga oshiriladi spirtli chiroqning alangasi bilan yuqoriga qarab surting. Siz smearlarni 96 ° spirtda (10-15 daqiqa) tuzatishingiz mumkin. Ruxsat etilgan zarbalar siz xohlagancha saqlanadi. Bo'yalgan surtmalar immersion linzalar yordamida tekshiriladi. Agar xohlasangiz, xulosa qiling balzamda: bo'yalgan va yaxshi quritilgan smearga bir tomchi balzam qo'llaniladi va qopqoqli stakan ostiga qo'yiladi.
Lefleur metilen ko'k bilan bo'yash Bo'yash jarayoni
1. Qattiq tamponga metilen ko‘kining 0,1% li suvli eritmasini quying 3-5 min. Bo'yoq filtrlanmasligi mumkin.
2. Bo'yoq drenajlanadi va preparat musluk suvida yaxshilab yuviladi.
3. Smear filtr qog'oz bilan quritiladi.
Gram dog'i
1. Ruxsat etilgan bo'yoq karbolik yoki anilin gentianiga quying binafsha bo'yoq (yoki kristall binafsha) 2-3 daqiqa davomida. Yog'ingarchilikni oldini olish uchun filtr qog'ozidan o'tkazing. Ilgari filtr qog'ozining chiziqlari bilan ishlash juda qulay yuqoridagi bo'yoqlardan birining 1% spirtli eritmasi bilan singdirilgan va keyin quritilgan. Bu rangli va quritilgan qog'oz smear va qo'llaniladi distillangan suv bilan namlanadi. Bo'yash muddati bir xil bo'lib qoladi (2-3 daqiqa).
2. Bo'yoqni to'kib tashlang, filtr qog'ozini muloyimlik bilan va tezda olib tashlang musluk suvida yuvib tashlang (15-30 s).
3. Lyugol eritmasini smearga quyib ishlov bering, 1-2-3 daqiqa.
4. Musluk suvida yuving (ixtiyoriy).
5. 96 ° spirt bilan farqlang, ko'k bo'yoq barglari chiqmaguncha uni to'kib tashlang va to'kib tashlang va bo'yoq rangini o'zgartirmaydi (taxminan 20-40-60 s). Differentsiatsiya paytida dori doimo chayqatiladi.
6. Suvda yaxshilab yuvib tashlang.
7. Qo'shimcha binoni (gram-manfiy bakteriyalarni aniqlash uchun) yoki
Neytral qizilning 0,5% suvli eritmasi (neytral og'iz) yoki suyultirilgan (10 ga). marta) karbolik fuksin Ziel bilan (1-2-3 min).
a) 96% etanol;
b) 100% etanol;
v) 10% formalin;
d) Nikiforov aralashmasi;
e) metanol.
3. Sitologik preparatlarni bo'yash sifati quyidagilarga bog'liq:
a) bo'yoqning turi, tarkibi, konsentratsiyasi;
b) bo'yash muddati;
v) preparatlarni tayyorlash vaqti;
d) muhitning pH;
e) bo'yash jarayonida havo harorati;
e) yuqoridagilarning barchasi.
4. Sitokimyoviy tadqiqotlar uchun fiksator qo'llaniladi:
a) metanol;
b) etanol 70%;
v) formalin 10%;
d) maxsus fiksatorlar;
e) Nikiforov aralashmasi.
Modul 6
Sitologik diagnostika mezonlari
• Tarqalgan.
• Klasterlarda.
• tuzilmalarda.

Tarqalgan joylashish deganda hujayralar preparatlarda birin-ketin, bir-biridan alohida yotishini bildiradi: klasterlarda joylashish - hujayralar bir-biriga tutashgan, lekin ancha erkin, tuzilmalar hosil qilmasdan; tuzilmalarda joylashish - hujayralar ma'lum turdagi shakllanishlarda o'zaro bog'langan:

• Qatlamlar.
• Asal chuqurchasiga o'xshash tuzilmalar (6.1-rasm). • Palisadega o'xshash tuzilmalar (hujayralar tasma shaklida joylashgan.

yadrolari).

• Papiller (papiller) tuzilmalar (hujayralar bir-birini o'rab oladi).
• Glandular tuzilmalar (tuzilmalar yumaloq, yadrolari joylashgan
ekssentrik, markazda - maxfiy, tuzilmasiz modda).
• Sferik tuzilmalar.
• Follikulyar (follikulga o'xshash) - hujayralar periferiyada joylashgan, strukturaning markazida - sir.
• Rozeta shaklida (bir qavatli tuzilish, hujayralarning asosiy qismi aylana hosil qiladi. Markazda bir nechta hujayralar joylashgan).
Benign lezyonlar hujayralarning to'g'ri, tartibli joylashishi, ular orasidagi taxminan bir xil masofa, strukturani tashkil etuvchi hujayralar va yadrolarning o'xshash o'lchamlari bilan tavsiflanadi.
Tuzilmalar malign neoplazmalarga xosdir. Qaysi komplekslar deyiladi (saratonda, epiteliy to'qimasidan o'smalar paydo bo'ladi)
yoki to'plamlar sarkomada, epiteliy bo'lmagan o'smalarda paydo bo'ladi biriktiruvchi, mushak, asabiy).
Komplekslardagi hujayralar bir-birining ustiga to'planadi, ularda tartib yo'q
Manzil. Morfologik xususiyatlariga qarab, komplekslar quyidagilar bo'lishi mumkin:
• Qatlamlar shaklida (hujayralarning bo'sh tartibsiz joylashishi):
- noaniq shakl (6.2-rasm);
- "toshli toshli qoplama>> shaklida;
Sitoplazmaning bo'yalishi xarakterining o'zgarishi (notekis bo'yash turli hududlar).
2. Hujayralardan komplekslarning hosil bo'lishi - normaldan boshqa tuzilmalar:
• Hujayralar orasidagi masofa har xil.
• Hujayralar to'plami. • Qutblanishning yo'qolishi - hujayra yadrolari turli yo'nalishlarga yo'naltirilgan.
3. Preparatning fonini o'zgartirish; ko'plab xavfli o'smalar o'simta diatezi - biriktiruvchi to'qimalarning invaziyaga reaktsiyasi (o'simtaning urug'lanishi) bilan tavsiflanadi. Bu reaksiya donador massalar, leykotsitlar, eritrotsitlar paydo bo'lishida namoyon bo'lib, “iflos>> fon ko'rinishini hosil qiladi.

Yaxshi va yomon xulq-atvorning qiyosiy tavsiflari shaklda ko'rsatilgan. 6,5-6,14.