Yuqori samarali suyuqlik xromatografiya usuli reja: Suyuq xromatografiyaning printsipi hplc ning ishlatilish sohalari

NASOSLASH TIZIMI 
Mobil fazaning boshqariladigan oqim tezligini ta'minlash uchun nasos tizimi 
talab qilinadi. Bosim tebranishlarini kamaytirish kerak, masalan, bosimli mobil 
fazani damping qurilmasi orqali o'tkazish. Kapillyarlar va bog'lovchi tugunlarning 
o'tkazuvchan tizimi nasos tizimining ishlashi paytida paydo bo'ladigan bosimga 
bardosh berishi kerak. Yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasida ishlatiladigan 
nasos tizimlari degazatorlar bilan jihozlanishi mumkin. 
Mikroprotsessor bilan boshqariladigan mobil fazani etkazib berish tizimlari 
ma'lum bir dasturga muvofiq doimiy (izokratik elyusiya) yoki o'zgaruvchan 
(gradient elyusiya) tarkibining mobil fazasini aniq etkazib berishni ta'minlashi 
kerak. Gradientli elyusiya holatida erituvchi (lar)ni bir nechta tanklardan etkazib 
beradigan nasos tizimlari qo'llaniladi, ularning aralashuvi nasoslar tomonidan 
yaratilgan past yoki yuqori bosimda sodir bo'ladi. 
NAMUNA KIRISH BIRLIGI (INJEKTOR) 

---

Sinov namunasi eritmasi yuqori bosimli namuna quyish moslamasi yordamida 
ustunning mobil fazali oqimiga kiritiladi. Namunani in'ektsiya qilish uchun qo'lda 
yoki avtomatik ravishda boshqarilishi mumkin bo'lgan qattiq hajmli dispenserlar 
yoki sozlanishi hajmli qurilmalar qo'llaniladi. Dispenser halqasini qo'lda qisman 
to'ldirish AOK qilingan namuna hajmining aniqligini pasaytiradi. 
STATSION FAZA 
Yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasi statsionar fazalarning ko'p 
turlaridan foydalanadi: 
- normal fazali xromatografiyada ishlatiladigan silikagel, alumin yoki g'ovakli 
grafit, bunda ajratish adsorbsiya va massa taqsimotidagi farqlarga asoslanadi 
(bo'linish xromatografiyasi); 
– oddiy fazada (adsorbsion xromatografiya) va teskari fazali xromatografiyada 
qo‘llaniladigan polimerlar, silikagel yoki g‘ovakli grafitdan tayyorlangan ko‘p sonli 
kimyoviy modifikatsiyalangan tashuvchilar, bunda ajratish harakatlanuvchi va 
statsionar faza o‘rtasidagi molekulalarni ajratishga asoslangan; 
- kislotali yoki asosli guruhlar bilan o'zgartirilgan, ion almashinadigan 
xromatografiyada qo'llaniladigan qatronlar yoki polimerlar, bunda ajratish 
ajratiladigan ionlar va harakatlanuvchi faza ionlari o'rtasidagi raqobatdosh o'zaro 
ta'sirga asoslangan; 
- g'ovakli silikagel yoki o'lchamni istisno qilish xromatografiyasida 
ishlatiladigan polimerlar, bunda ajratish sterik chiqarib tashlashga mos keladigan 
molekulyar o'lchamdagi farqga asoslanadi; 
- kimyoviy modifikatsiyalangan maxsus statsionar fazalar, masalan, tsellyuloza 
yoki amiloza hosilalari, oqsillar va peptidlar; 
- siklodekstrinlar va boshqalar enantiomerlarni ajratish uchun ishlatiladi (xiral 
statsionar fazalarda xromatografiya); 
- 
turli 
turdagi 
suyuqlik 
xromatografiyasining 
yuqori 
samarali 
modifikatsiyalarida qo'llaniladigan boshqa statsionar fazalar. 
Ko'pgina ajralishlar statsionar faza sifatida kimyoviy modifikatsiyalangan 
silika gel va mobil faza sifatida qutbli erituvchilar o'rtasidagi bo'linish mexanizmiga 

---

asoslanadi. Tashuvchining yuzasi, masalan, silikagelning silanol guruhlari turli silan 
reagentlari bilan reaksiyaga kirishib, tashuvchining yuzasida har xil miqdordagi faol 
guruhlarni qoplaydigan kovalent bog'langan silil hosilalarini hosil qiladi. Bog'langan 
fazaning tabiati xromatografik tizimning ajratish xususiyatlarini aniqlaydigan 
muhim xususiyatdir. 
Quyida eng ko'p ishlatiladigan bog'langan fazalar keltirilgan: 
Oktil
– Si-[CH
2
]
7
-CH
3 
C
8 
Oktadesil 
– Si-[CH
2
]
17
-CH
3
С
18 
Fenil
– Si-[CH
2
]
n
-C
6
H
5
C
6
H
5 
Sianopropil – Si-[CH
2
]
3
-CN 
CN 
Aminopropil – Si-[CH
2
]
3
-NH
2
NH
2 
Diolli
– Si-[CH
2
]
3
-O-CH(OH)-CH
2
-OH 
Agar ishlab chiqaruvchi tomonidan boshqacha tartib belgilanmagan bo'lsa, 
kolonkalardagi silika asosidagi teskari fazali statsionar faza 2,0 dan 8,0 gacha 
bo'lgan pH qiymatlarida mobil fazalarda barqaror hisoblanadi. G'ovakli grafit yoki 
polimer materiallarning zarralari bo'lgan ustunlar, masalan, divinilbenzol bilan stirol 
kopolimeri kengroq pH diapazonida barqarordir. 
Ba'zi hollarda tahlil qilish uchun normal fazali xromatografiya qo'llaniladi, 
unda statsionar faza sifatida modifikatsiyalanmagan silikagel, g'ovakli grafit yoki 
kimyoviy modifikatsiyalangan qutbli guruhlar (masalan, siyanopropil yoki diol) 
bilan silikagel ishlatiladi. 
Amaldagi statsionar fazalarning ko'pchiligi uchun zarracha hajmi 2 mkm dan 
10 mkm gacha. Zarrachalar sharsimon yoki tartibsiz shaklga, har xil g'ovaklikka va 
o'ziga xos sirt maydoniga ega bo'lishi mumkin. Bu parametrlar muayyan statsionar 
fazalarning xromatografik harakatini aniqlaydi. Teskari fazali xromatografiyada 
qo'shimcha hal qiluvchi omillar statsionar fazaning tabiati, uglerod miqdori bilan 
ifodalangan bog'lanish darajasi va endkapping (ya'ni, qolgan silanol guruhlarining 
sililatsiyasi) hisoblanadi. Qoldiq silanol guruhlari, ayniqsa, asosiy moddalar uchun 
cho'qqining orqa tomonining bulg'anishiga sabab bo'lishi mumkin. 
G`ovakli zarrachalarga qo'shimcha ravishda, sirt g`ovakli yoki monolitik 

---

materiallardan foydalanish mumkin. 
Monografiyada boshqa ko'rsatkichlar bo'lmasa, analitik xromatografiyada turli 
uzunlikdagi va ichki diametrli zanglamaydigan po'latdan yasalgan ustunlar 
qo'llaniladi. Ichki diametri 2 mm dan kam bo'lgan ustunlar ko'pincha mikro ustunlar 
deb ataladi. Tahlil paytida mobil faza va ustunning harorati doimiy bo'lishi kerak. 
Ko'pgina tahlillar xona haroratida amalga oshiriladi, ammo ustunning optimal 
ishlashi uchun boshqa haroratlar talab qilinishi mumkin.