Biotexnologiya

Rekombinant DNK texnologiyasi

---

Restriktaza-ligaza usuli - rekombinant DNK olishning eng sodda va oson usuli hisoblanadi. Bu 
usulda DNK molekulasi va vektor plazmida «yopishqoq»uchlar hosil qiluvchi restriktaza bilan 
qirqiladi va aralashtirilgan holda ma’lum sharoitda reassotsiatsiya qilinadi. Komplementarlik 
xususiyatiga ko‘ra DNK molekulalari o‘zaro vodorod bog‘lari yordamida birikib xalqasimon 
struktura hosil qiladi va DNK zanjirining birikmagan joylari DNK-ligaza fermenti yordamida 
ulanadi.
Linker molekulalaridan foydalanish usulida - DNK molekulasiga va vektor plazmidaga T4 fag 
DNK-ligaza fermenti yordamida maxsus nukleotid ketma-ketligiga ega bo‘lgan linker molekula
ulanadi. Olingan ikki turdagi DNK molekulasi restriktaza fermenti yordamida qirqilib, 
aralashtirilgan holda qaytadan assotsiatsiya qilinadi. DNK va vektor plazmida molekulalarining 
birikmagan joylari DNK-ligaza fermenti yordamida ulanadi. SHu yo‘sinda rekombinant DNK 
molekulasi 
hosil 
bo‘ladi. 
4
 
 
VEKTOR MOLEKULALAR, GENLAR BANKINI YARATISH VAALOHIDA 
GENLARNI AJRATISH TEXNOLOGIYASI 
Rekombinant DNKni avtonom replikatsiya bo‘lishi uchun javob beradigan DNK bo‘lagi - 
vektor molekulalari
deyiladi. 
Vektor molekulalar o‘z vazifasiga ko‘ra ikki tipga bo‘linadi: 
Birinchisi -avtonom replikatsiya bo‘luvchi vektorlar. 
Ikkinchisi - xromosomaga integratsiya bo‘luvchi vektorlar.
Vektor molekulalar gen muhandisligi biotexnologiyasida genlarni klonlashda va transformatsiya 
qilishda asosiy ish quroli bo‘lib xizmat qiladi. Vektor molekulalari vazifasini fag DNK lari, 
plazmidalar va o‘simliklarni xloroplast hamda mitoxondrial DNK lari o‘tashi mumkin.
Xo‘jalik ahamiyati qimmatli bo‘lgan genlarni ajratish uchun gen banki tuziladi. Xromosomal 
DNK asosida gen bibliotekasini tuzish quyidagicha amalga oshiriladi:
DNK va vektor molekulalar restriktaza fermenti yordamida qirqiladi va ma’lum sharoitda 
qaytadan assotsiatsiya qilinadi; 
Nukleotidlar orasida ulanmay qolgan bo‘shliq DNK-ligaza fermenti yordamida o‘zaro 
biriktiriladi; 
Olingan rekombinant DNK bakteriya hujayrasiga transformatsiya qilinadi.
Xromosomal DNK da mavjud genlarni to‘la klonlash uchun DNK o‘lchamiga va olingan 
klonlarni soniga e’tibor berish kerak.
Genlarni klonlashda ko‘pincha kDNK bibliotekasini tuzish maqsadga muvofiqdir. Bu holda 
maxsus poli (Y) va oligo (dT) kolonkalari yordamida uchlarida poli (A) nukleotidlar ketma-ketligini 
4
Daan J.A.Crommelin, R.D.Sindelar, B.Meibohm“Pharmaceutical biotechnology: Fundamentals 
and application” 4th Edition. - Springer, 2013. - 551 p.

---

saqlovchi iRNK, tRNK va pRNK dan ajratib olinadi. Olingan iRNK molekulasi oligo (dT) 
nukleotidlari bilan aralashtirilib reassotsiatsiya qilinadi. 
Bunda iRNK molekulasining poli (A) uchida dA-dT qo‘sh zanjirli segment hosil bo‘ladi.
Ushbu ikki zanjirli segmentning oligo (dT) uchi kDNK sintezini amalga oshiruvchi revertaza 
fermenti uchun praymer (kDNK sintezining boshlanish nuqtasi) vazifasini o‘taydi.
Sintez qilingan kDNK molekulasi qisqa uchli ikki zanjirli struktura bilan tugallanadi. kDNK 
sintezida matritsa vazifasini o‘tagan iRNK molekulasi NaOH bilan parchalanadi, natijada qisqa ikki 
zanjirli va to‘liq iRNK molekulasiga komplementar bo‘lgan bir zanjirli kDNK molekulasi hosil 
bo‘ladi.
Hosil bo‘lgan qisqa ikki zanjirli struktura kDNK ning ikkinchi zanjirini sintez qilishda praymer 
vazifasini o‘taydi. DNK-polimeraza I fermenti yordamida kDNK ning ikkinchi zanjiri sintez 
qilinadi. Hosil bo‘lgan kDNK ning bir zanjirli qismi SI-nukleaza fermenti yordamida parchalanadi 
va ikki zanjirli kDNK molekulasi hosil bo‘ladi. SHu yo‘sinda hosil bo‘lgan kDNK molekulasi 
vektor molekulalariga ulangan holda klonlanadi.
Har ikki usul bilan yaratilgan genom bibliotekasidan individual genlarni ajratib olish 
quyidagicha amalga oshiriladi - rekombinant plazmida denaturatsiya qilinadi (100
0
S haroratda 5 
min., 0,2 N NaOH eritmasida 15 min.), bir zanjirli DNK molekulasi stabil qo‘zg‘almaydigan 
holatda turishi uchun nitrotsellyuloza filtriga biriktiriladi. Olingan filtr [g
-32
P] ATF nukleotidi bilan
nishonlangan iRNK molekulasi bilan gibridizatsiya qilinadi.
Molekulyar gibridizatsiya jarayonida filtrga birikkan rekombinant DNK molekulasiga 
komplementarlik qonuniyati asosida nishonlangan iRNK molekulalari birikadi. 
Hosil bo‘lgan gibrid DNK molekulasi denaturatsiya qilinib, nishonlangan iRNK molekulasi 
ajratib olinadi (elyusiya yordamida). Olingan iRNK molekulasi hujayrasiz oqsil sintez qilish 
tizimida tekshirib ko‘riladi. Hosil bo‘lgan oqsil molekulasini identifikatsiya qilish yo‘li bilan 
individual genlarni ajratib olish amalga oshiriladi.
5