Komplementni suyultirish sxemasi ya'ni qatoriga antigenning ikki marotaba oshirib borilgan eritmasidan 0,5 ml miqdorida olinadi. Birinchi qator probirkalarga teng miqdorda (0,5 ml) spetsifik qon zardobi qo'shiladi, bu qon zardobining suyultirilishi esa to'rt marotaba oshirib boriladi. 28-jadval
Ingrediycntlar
Probirkalar
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
Komplement 1:10 nisbatda suyultirilgan (ml).
0,05
1
0,15
0,2
0,25
0,3
0,35
0,4
0,45
Natriy xloridning izotonik suyuqligi (ml).
0,95
0,9
0,85
0,8
0,75
0,7
0,65
0,6
0,55
0,5
Gemolitik sistema (37° termostatda 30 daqiqa saqlangan, ml)
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
Probirkalardagi aralashmalar yaxshilab silkitilib, 37°C termostatda 30 daqiqa davomida ushlab turiladi.
Reaksiya- larning natijalari
-
-
+
+
+
+
+
+
+
-
llova: gemoliz (+), gemoliz (-)
Ikkinchi qatordagi probirkalarga teng miqdorda va shu suyultirilgan miqdorda normal qon zardobi qo'shiladi (antigen spetsifikligini kontrol qilish uchun). Uchinchi qator probirkalarga 0,5 ml natriy xloridning izotonik suyuqligidan qo'shiladi. Mamma probirkalarga ikki marotaba suyultirilgan komplementdan 0,5 ml qo'shib, yaxshilab aralashtiriladi va 37° termostatga 60 daqiqaga qo'yiladi. Antigen qo'shilmagan qon zardobi ikkinchi kontrol bo'lib xizmat qiladi. Probirkalar termostatdan olinib, hammasiga 1 ml gemolitik sistema qo'shiladi va yana termostatga 30 daqiqaga qo'yiladi. Antigen birligi deb, uning eng yuqori suyultirilgan miqdori olinadi va shu suyultirilgan miqdorida spetsifik qon zardobi ishtirokida eritrotsitlarni ikki musbat (++) belgigacha gemolizga uchratmaydigan miqdori olinadi. Antigenning ishchi fazasi esa uning kam suyultirilgan miqdori bo'lib, shu suyultirilgan miqdorda spetsifik qon zardobi bilan birga reaksiyada ishtirok etadi va eritrotsitlarning gemolizini normal qon zardobi va xlorid natriy suyuqligi yordamida tishlab qololmaydigan miqdoriga aytiladi. Gemolitik sistema - Gemolitik qon zardob+ qo'y eritrotsitlari (1:1 nisbatda), gemolitik qon zardob, inaktivatsiya qilingan (56°C 30 daqiqa suv hammomida saqlangan) quyonning qon zardobi bo'lib (tarkibida gemoliz saqlaydi), qo'y eritrotsitlari bilan quyonni giper immunlash yo'li bilan olinadi. Gemolitik zardob 1:1200 titrda chiqariladi, shuning uchun 1:400 nisbatda suyultiriladi. Qo'y eritrotsitlari suspenziyasi fibrinsizlashtirilgan qo'y qonidan tayyorlanadi, eritrotsitlar natriy xloridning izotonik eritmasida butunlay rangsizlanguncha tiniq holiga kelguncha sentrifuga yordamida yuviladi va undan natriy xloridning izotonik eritmasidagi 3 % suspenziyasi tayyorlanadi. KBR ni qo'yish uchun ishchi doza sifatida gemolitik zardobning 3 marta yuqori titri olinadi. Asosiy tajribani o'tkazish. Barcha ingrediyentlar titri va ishchi dozalari aniqlangandan so'ng KBR asosiy tajribasi o'tkaziladi (29-jadval). Tekshirilayotgan va kontrol qilinayotgan qon zardoblar oldindan 56°C 30 daqiqa suv hammomida komplementi aktivsizlantiriladi. KBR ning birinchi fazasida, ya'ni 37°C da 30 daqiqa davomida antigenning tekshirilayotgan zardob va komplement bilan birikishini taqozo etadi. Agar KBR sovuq sharoitda o'tkaziladigan bo'lsa, bu faza 0-4 °C da 18-20 soat davomida o'tkaziladi, bu esa reaksiya sezgirligini oshiradi.
