KLİNİK İmmunolojide hastaliğin tanisi iÇİN

NK sitotoksisite ölçümü

 Antikora bağımlı hücresel sitotoksisite ölçümü

•  CR 51 ile işaretlenmiş ve yıkanmış hedef hücrelere
• Anti- hedef hücre Ig G ile
•  FcR bulunan effektör hücreler (NK, makrofajlar) eklenir
•  Hedef hücrelerden CR 51 salınır
•  Gamma sayacında CR 51 ölçülür
•  CR 51 miktarı,
• ♣ NK hücre sayı ve aktivite düzeyi ile doğru orantılıdır

Lenfosit uyarımı

• Lenfosit uyarımı

•  Otoimmunite
•  Kanser patogenezinde
•  İntraselüler enfeksiyonlarda
•  Hücresel immun yanıtın ölçümünde uygulanmaktadır

• Genelde T hücre bazen B hücre yanıtı değerlendirilir

• Aktive olan T hücreleri

•  Morfolojik ve fenotipik değişikliğe uğrarlar

•  Büyüklüğü değişir
•  Histolojik boyamada kromatik değişiklik
•  Dinlenme halinde olmayan
•  Ancak; aktive olduğunda ortaya çıkan yüzey proteinleri meydana gelir

LAT;

• LAT;

•  Hasta lenfositlerinin
•  Özgül antijenle
•  Veya özgül olmayan antijenlerle
•  İnvitro uyarılmasına dayanır
•  İki tipi vardır
• 1)Yüzey fenotipi (aktivasyon belirteçleri) değişikliklerini belirlemek
•  Aktivasyon belirteçleri
•  Ya enflamasyon bölgesinden direkt hücrelerden
•  Ya da invitro uyarılan lenfositlerden aranır
• ♣ FLOWSİTOMETRİ ile belirlenir

2) Uyarı sonrası lenfositin proliferasyon yeteneğini ölçmek

• 2) Uyarı sonrası lenfositin proliferasyon yeteneğini ölçmek
•  Lenfoblast transformasyon testi (LTT)
•  96 kuyucuklu plaklarda yapılır
•  T hücre uyaranları olarak
•  Fitohemaglutin (PHA)
•  Konkovalin A (ConA)gibi lektinlerle
•  Süperantijenler gibi bakteriyel toksinlerle
•  B hücre uyaranları olarak,
•  Süperantijenler
•  LPS kullanılır

LTT TESTİNDE;

• LTT TESTİNDE;
•  Antijen ve lenfositlerin 72 saat kültürü yapılır
•  H timidin eklenir
•  H timidin çoğalan DNA yapısına girer
•  Radyoaktif veya fluoresan boya ile
•  DNA sentez hızı ve miktarı ölçülür
• ♣ Hasta ve kontrol karşılaştırmaları ile yorumlanır

 Karışık lenfosit kültürü

•  Karışık lenfosit kültürü
•  Alıcı ve verici kanından ayrılan lenfositler
•  İnvitro besiyerinde karıştırılarak
•  Lenfosit kültürü yapılır
• ♣ Antijenik farklılık varsa
• ♣ Biri diğerini aktive eder
• ♣ Blastik dönüşümle DNA miktarı artar
•  DNA sentezinin kantitatif ölçümü yapılır
•  Bazen verici lenfositleri
• ♣ X ışınları ile işleme sokulur
• ♣ Blastik dönüşüm olmaz
• ♣ Alıcının lenfositleri uyarılır
• ♣ Alıcının verilecek Dokuya karşı reaksiyon ölçülür
•  Buna tek yönlü karışık lenfosit kültürü denir
•  Doku transplantasyonunda
• * HLA- D (LD antijenleri) antijenleri saptanır
•  Sitolitik T hücre yanıtının değerlendirilmesinde

 Lenfositotoksik test

•  Lenfositotoksik test
•  Test prosedürü
•  HLA antijeni saptanacak total lenfositler veya CD 19 B lenfosit
•  Hangi HLA’ya ait olduğu bilinen anti-serum
•  Kompleman
•  Tripan mavisi veya eozin boyası
• ♣ Antijen + antikor birleşir
• ♣ Kompleman bağlanır
• ♣ Lenfosit zarı zedelenir
• ♣ Boya lenfosit içine girer
• ♣ Mikroskopta %50’den fazla boyanan lenfosit miktarı
•  Denenen lenfositleri, bilinen anti- HLA tipine ait olduğunu gösterir
•  Doku transplantasyonunda
• * HLA A,B,C antijenlerin göstermede kullanılır

• Sitokin sentezini belirleme testleri

•  Aktive T hücreler değişik sitokinler üretirler
•  Enflamasyon bölgesinden elde edilen T lenfositler
•  İnvitro kültürü yapılır
•  Total sitokin sentezini verir
• ELISPOT (Enzimle işaretli immunspot)
• Gama- IFN (Quantiferon) sentezleyen hücre sayısı yüzde olarak belirlenir
• ELISA ile TH1’lerce sentezlenen gama IFN (Quantiferon) miktarı kantitatif olarak saptanır
•  Flowsitometrik yöntemle
•  Tüm farklı sitokin sentezleri ölçülebilir

M/M Hücreleri

• M/M Hücreleri

• Doğal bağışıklıkta rol alırlar

•  Ve özgül bağışıklığı sitokinlerle koordine ederler

• Spesifik patojenleri yok eden efektör hücrelerdir

• Apoptosizde apoptotik hücreleri temizlerler

•  Bu hücreler doku örnekleri yada hücre süspansiyonlarından MAbs ile saptanırlar
•  Monositin en iyi belirlenmesi;
•  FLOWSİTOMETRİDE
•  Anti, CD14 mAbs ile olur
•  Ayrıca CD11b, CD11c, CD16, CD32, CD64 gibi taşıdıkları reseptörlerle tanımlanmaları yapılır
•  Histokimyasal boyama olarak
•  Non spesifik esteraz Boyaması
•  Monositer lösemi tanısında kullanılır

Duyarlı lenfosit ile antijen teması sonucu

•