IgM’in Fc bölgesine karşıt anti-IgM Ab katı faza
bağlanır
Üzerine hasta serumu (IgM?) konulur
Üzerine viral antijen
Enzimle işaretli antikor
Substrat…
Konjugat faz formu
Katı fazda viral Ag
Hasta serumu (IgM?)
ENZİMLE İŞARETLİ anti IgM Ab (KONJUGAT)
Substrat…
UYGULAMA CİHAZ SİSTEMLERİ
UYGULAMA CİHAZ SİSTEMLERİ
MİKROELİSA TEMELLİ AÇIK SİSTEMLER
Klasik Cihazlar
İlk yıllarda kullanılan bağımsız yıkayıcı ve okuma cihazlarından ibaret sistem
Yarı Otomatik veya Tam Otomatik Cihazlar
Örnek yükleme, Yıkama ve okuma cihazları entegre sistemler
MAKROELİSA TEMELLİ KAPALI SİSTEMLER
Kan bankası rutin çalışmalarına son yıllarda giren sistemlerdir.
Çalışma sistemleri ve Prensipleri;
Kapalı bir cihaz ve bu cihazda çalışmaya uygun kitler ile cihaza bağlı bilgisayar ve yazıcı.
Piyasada en sık bulunan sistemlerde kullanılan kitler;
Enzyme-linked flureskent assay (ELFA)
Mikro partikül enzim immuno assay (MPEIA)
Fluoresan polorizasyon immuno assay (FPIA)
Chemiluminescent Assay (CA) yöntemleri ile çalışmaktadır.
Bu sistemlerin;
Bu sistemlerin;
BAŞLICA AVANTAJLARI
Duyarlılık ve özgüllükleri yüksektir.
Tam otomatik (inkübasyon, yıkama, reaktif pipetleme işlemleri) 24 saat kesintisiz çalışmaktadırlar. Açık sistemlere göre kontaminasyon, teknisyen hataları son derece azalmaktadır.
Random acces(Rastgele erişimli)
Çok sayıda farklı testi aynı anda ve aralıklı yapan sistem
İstenilen bir test istenilen bir örnekten istenilen bir durumda(acil)yapabilmeye uygun
STAT girişli (tek örnek ve bir örneklik reaktif kullanımı) olmalarıdır.
Reaktif kompartmanlarının 2-8 0C sahip olmalarıdır ve cihazlarda atık torbalarının olması.
Bunların yanında gerek cihaz donanımı gerek kitlerin hazırlanma tekniklerine ilişkin olarak avantajları vardır.
DEZAVANTAJLARI
DEZAVANTAJLARI
Kurumu tek cihaza ve buna bağlı olarak tek kite zorunlu kılmaları
Açık sistemlere göre pahalı olmaları
Viral lizat veya rekombinant antijenler Sodyum dodesilsulfat yardımıyla (SDS)
Viral lizat veya rekombinant antijenler Sodyum dodesilsulfat yardımıyla (SDS)
POLİACRYLAMİD JEL zemininde, molekül ağırlıklarına göre elektroforetik olarak ayrılır.
Polipeptit antijenler, ikinci bir elektroforez ile NİTROSELÜLOZ MEMRAN ŞERİTLER ÜZERİNE transfer edilir.
Hasta serumu ile şerit üzerindeki antijenler özel bir testte temas ettirilir (elektroforetik yöntem)
Hasta serumunda aranılan antikorlar varsa, şerit üzerindeki antijen bulunan BANDLARDA RENK KOYULUĞU (KOYU-ZAYIF-RENKSİZ) oluşur.
Kitin internal Pozitif ve Negatif kontrollerindeki band renkleri değerlendirmede önemlidir.
Ve band için, HANGİ ANTİJEN VARSA REAKTİF kabul edilir.
Şeritlerin üzerindeki bandların pozitifliğine göre o hasta için, etkenin sonuç virulansı patternlerine göre POZİTİF-NEGATİF VEYA SAPTANMAYAN sonuç verilir.
Etkene özgü IgM, IgG, IgA antikorlarına göre test yapılabilir.
HIV, H.pylori ve T.pallidum enfeksiyonlarının tanısında özgüllüğü yüksek olarak kullanılmaktadır.
HÜCRESEL İMMUNİTEYE YÖNELİK TEST YÖNTEMLERİ
İKİ BAŞLIK ALTINDA İNCELENİR
İNVİTRO TEST YÖNTEMLERİ
İNVİVO TEST YÖNTEMLERİ
1)LÖKOSİT SAYIM VE FENOTİPLEMESİ
1)LÖKOSİT SAYIM VE FENOTİPLEMESİ
LÖKOSİT SAYIMI
Mikroskopik yöntemlerle
Hemositometrik hücre sayımı
Işık mikroskobu (40’lık)
Thoma ve Neabaur lamları
%0.4’lük tripan mavisi
♣ Rutinde Pek kullanılmıyor
Gelişmiş immuno hemotolojik cihazlar
En uygun yöntemdir
Piyasada farklı firma cihazları var
LÖKOSİT FENOTİPLEMESİ
Vücudun değişik bölgelerinde
Kemik iliği, kan, dalak ve lenf nodüllerinde
Lökositlerin sayı ve tipleri
♣ Lenfositlerin
B lenfositleri
T lenfositleri
T4 ve T8
♣ Monositlerin
♣ Granülositlerin
Nötrofiller
Bazofiller
Eozinofiller
İmmuno hematolojik cihazlar,
Flowsitometrik cihazlarla
Hücre yüzey moleküllerinin (Marker) fenotiplemesi
Hücre yüzey moleküllerinin (Marker) fenotiplemesi
CD (cluster of differntiation – farklılaşma kümeleri) antijenleri
Hematopoetik hücrelerin yüzeyinde yer alırlar
250’ye yakın CD tanımlanmıştır
♣ Örneğin CD4 T, CD8 T, CD45 B lenfosit gibi
Lökositlerin yüzeyindeki CD antijenik epitopları
