Mavzu: Genomni tahrirlash texnologiyasi Reja. Genom tahrirlash usullari

Genni nishonga olish
Jarayon samaradorligini oshirish usuli
Hamma narsa juda oddiy - yo'naltirilgan ikki qatorli uzilishlar!
Agar siz DNKga ikki zanjirli uzilishni kiritsangiz va bir vaqtning o'zida hujayra ichiga hosil bo'lgan uchlari bo'ylab gomologik rekombinatsiya uchun konstruktsiyani kiritsangiz, rekombinatsiya samaradorligi sezilarli darajada oshadi. Biroq, gomologik bo'lmagan end qo'shilish (NHEJ) hodisalarining nisbati nisbatan past.
Sink barmoq yadrolari
(ZFN, sink barmoq yadrolari)
FokI kesuvchi endonukleazini ikkita alohida domenga bo'lish mumkinligi ko'rsatildi : DNKni bog'lash va kesish endonukleaza. Ma'lum bo'lishicha, ikkinchisi ketma-ketlikda ishlaydi, ya'ni u bog'langan domen aloqa qilgan har qanday DNK mintaqasini kesib tashlaydi.
Va 1996 yilda ZFNlar birinchi marta amalda sinovdan o'tkazildi: endonukleaza o'ziga xos bo'lmagan FokI domenidan va "sink barmoq" tipidagi DNKni bog'lovchi domenlardan tashkil topgan ximerik fermentlar.
Taxminan 30 aminokislotadan iborat bo'lgan sink barmog'i sink ioni bilan o'zaro ta'sir qiladi va 3 bp ni taniy oladigan barqaror tuzilmani hosil qiladi.
Har bir nukleotid triplet o'zining "sink barmog'i" ga ega.
Sink barmoq yadrolari
Har bir sink barmoq domeni nukleotidlarning uchligini taniydi. To'rt domenni birlashtirib, 12 nukleotidni taniydigan DNKni bog'lovchi domenni yaratish mumkin. FokI ning ishlashi uchun ikkita kichik birlik zarur bo'lganligi sababli, 24-bp ketma-ketligi odatda zarur bo'lgan ikki qatorli uzilishni kiritish joyining chap va o'ng tomonida tan olinadi. (har bir tomonda 12 ta), bu juda yuqori o'ziga xoslikni ta'minlaydi.
ZFN yordamida genomni tahrirlash birinchi marta hayvonlar hujayrasida amalga oshirildi (2002-2003).
Sink barmoq yadrolari
2017 yilning noyabr oyida Qo'shma Shtatlar dunyoda birinchi marta tirik kattalar genomini tahrir qildi! Va ular CRISPR/Cas9 dan foydalanmadi , balki ZFN !!!
44 yoshli Brayan Mado tajribaga rozi bo'ldi, chunki uning so'zlariga ko'ra, u "har kuni og'riqdan azob chekardi". O‘z xastaligi, Hunter sindromi – churralar, oyoqlarning birinchi barmoqlarining deformatsiyasi, umurtqa pog‘onasiga suyak o‘sishi, ko‘z, quloq va o‘t pufagi bilan bog‘liq muammolar bilan kurashish uchun hayoti davomida 26 ta operatsiyani o‘tkazishga to‘g‘ri kelgan.
Jigar hujayralariga konstruksiyalarni yetkazib berishning virusli vositalaridan foydalanilgan.
2018 yil sentyabr oyida oraliq natijalar e'lon qilindi: davolash usuli ishlaydi!!! To'g'ri, olimlar kutganidek emas, lekin baribir odamlar uchun haqiqiy narsa osonroq bo'ladi!