Saib Gurban oglu Gulahmadov · Batjargal Batdorj · Mich`ele Dalgalarrondo

Time (hours)
0
5
10
15
20
25
30
pH
4
5
6
7
Activity (mm)
0
2
4
6
8
10
12
14
O
D
 620 nm
0
2
4
6
8
pH
Activity at 30 or 37 C
Growth at 10 C
Growth at 30 C
Growth at 37 C
Growth at 45 C
Fig. 3
Growth of Lactobacillus paracasei spp. paracasei BN ATS
8w at 10, 30, 37, and 45
◦
C and BLIS production at 30 or 37
◦
C under
uncontrolled pH
the substances studied have not yet been characterized
for amino acid and encoding nucleotide sequences, and
moreover, since it is not known if there is only one (or
more) inhibitory compound in each of the supernatants
of culture, they could be referred to as BLIS. In addition,
amylase totally inactivated the substances studied from all
the strains of L. paracasei, which supposed the presence of
a carbohydrate moiety (Table
5
).
α-Amylase is an extracel-
lular enzyme, which catalyzes the hydrolysis of
α-D-(1,4)
glycosidic bonds in oligosaccharides and polysaccharides.
The sensitivity to
α-amylase may imply the presence of an
essential carbohydrate moiety for bacteriocins as shown
by Lewus et al. [
34
] for leuconocin S, Keppler et al. [
35
]
for carnocin 54, and Losteinkit et al. [
36
] for bacteriocin
N15 produced by Enterococcus faecium N15. Amylase
did not cause any effect on the active agent produced by L.
rhamnosus, while lipase caused only a slight reduction of
activity of all the agents from selected strains.
The pH stability of the culture supernatants was studied in
the range 2–12. The activities of all the strains studied were
stable over a wide pH range from 3 to 11. The antimicrobial
substance in neutralized active culture supernatant fluid
appeared to be heat stable even at 100
◦
C for 10 min.
Growth of strains and BLIS production studies
The growth of BLIS-producing LAB strains was per-
formed at different temperatures without regulation of pH
(Fig.
3
). Cultivation was maximum at 30 and 37
◦
C, slowly
decreased at 45
◦
C and very limited at 10
◦
C. Activity
of the antibacterial agent produced by all the strains was
measured only at 30 and 37
◦
C and detected at the late
exponential phase. Production obtained in the case of BN
ATS 8w strain is shown in Fig.
3
.

---

Discussion
BLIS is a term applied to antagonistic substances, which
are incompletely defined or do not fit exactly the typical
criteria defining bacteriocins. They tend to have a broader
spectrum of activity than currently known bacteriocins. A
number of these substances were reported to be produced
by Lactobacilli and Lactococci, inhibiting a wide range of
both Gram-positive and Gram-negative bacteria as well as
of fungi [
37
–
39
].
Upon the two different kinds of cheeses analyzed, four
unclassified strains produced antibacterial compounds,
which were inactivated by proteolytic enzymes, such as
proteinase K and pronase E, indicating that they have a
protein nature and that they are bacteriocin-like inhibitory
substances. On the other hand, trypsin had no effect (except
for L. rhamnosus FAZ 16m). Other authors also observed
different susceptibility of bacteriocins, including nisin and
bacteriocin T 81 from Streptococcus thermophilus, to pro-
teolytic enzymes [
40
–
44
]. It was supposed that some pro-
teolytic enzymes did not affect the active domains of these
bacteriocins. According to Tagg et al. [
32
] and Jack et al.
[
33
] all the antimicrobial compounds found in this study
can be regarded as BLIS as they possess bacteriocin req-
uisites but have not yet been purified and characterized
for amino acid and encoding nucleotide sequences. The
sensitivity of the cell-free supernatant of LAB strains iso-
lated from Azerbaijani cheeses to amylolytic enzymes and