Сборник статей d Ставрополь, 2012 удк (082): 159. 9: 616-085:=>616-089: 616-053. 2: 616. 31 Ббк 72. 471. 3я431(2Рос-4Ста) и 66 Научно-практическая конференция с международным участием «Инновации молодых учёных»

A.B. Muravieva

Insufficiency of macro and microelements as one of the signs of predisposition to diabetes mellitus

Biochemical processes in the human organism depend on minerals which are the components of the biologically active substances. Many diseases are associated with insufficient amount of definite macro and microelements in the human organism. The balance of microelements may be destroyed at insufficient or abundant presence of them in the organism. Introduction of insufficient or removal of abundant amount of elements restores the health and viability of the human organism.

Key words: macro-microelements, diabetes mellitus.

УДК 615.1(075.8)

С.С. Наумов

Нейропсихотропные и хронотропные

свойства адаптогенных средств

ГБОУ ВПО «Ставропольская государственная медицинская академия»

Министерства здравоохранения РФ,

Ставрополь, Россия
Введение. Средства растительного (женьшень, родиола, элеутерококк и др.) и гормонального (мелатонин) происхождения обладают адаптогенной активностью (Арушанян Э.Б., 2007; Арушанян Э.Б., Бейер Э.В., 2009; Sánchez-Barceló E.J. et al., 2010). Указанные обстоятельства побуждают провести сравнительную оценку профиля нейропсихотропной активности веществ такого рода в опытах на животных и исследованиях на людях с оценкой их свойств в разные фазы суточного цикла.

Цель исследования. В опытах на животных и в исследованиях на здоровых добровольцах провести сравнительную оценку спектра нейропсихотропной и хронотропной активности адаптогенных средств растительного (тонизид, элеутерококк, билобил) происхождения и мелаксена – препарата эпифизарного гормона мелатонина, а также определить возможность нейропротективного действия адаптогенов на моделях органической церебральной патологии.

Материал и методы исследования. Опыты выполнены на 182 белых нелинейных крысах – самцах массой 200-250 г. Животные были ранжированы на несколько групп: с введением за 30 мин до тестирования тонизида – комплексного препарата растительных адаптогенов (200 мг/кг, Биолит, Россия, здесь и в дальнейшем вещества вводили внутрибрюшинно в течение 7 дней) – 40 крыс, билобила (100 мг/кг, КРКА, Словения) – 20 крыс, мелаксена (1 мг/кг, фирма Unipharm, USA) – 40 крыс и физиологического раствора (контроль) – 32 крысы. В свою очередь, каждая группа была разделена на две подгруппы в зависимости от времени введения лекарственных средств и времени тестрирования: утреннюю (с 7.00 до 9.00), и вечернюю (с 19.00 до 21.00).

У 60 животных воспроизводили экспериментальный ГИ по методу А.Н. Макаренко и соавт. (2002). У 40 животных моделировали острую ЧМТ с использованием модели «ударного ускорения» (Белошицкий В.В., 2005), после которой животные были разделены на 4 группы (по 10 в каждой), с введением мелаксена и тонизида. Инъекции начинали уже через 2 ч после операции в период так называемого «терапевтического окна». С целью выявления хронобиологических особенностей церебральной патологии все хирургические манипуляции выполняли в разное время суток - утром (с 7.00 до 8.00) и вечером (с 19.00 и до 20.00).

Эффекты препаратов регистрировали на 1-й, 3-й и 7-й дни после начала хронического введения.

Для изучения нейропсихотропной активности веществ в работе использованы стандартные психофармакологические тесты: "открытое поле" (ОП), «Приподнятый крестообразный лабиринт» (ПКЛ), «Условная реакция пассивного избегания» (УРПИ) (Хабриев Р.У. и др., 2005).

Неврологический статус животных оценивали по Международной шкале Neurological Severity Scores (NSS), предложенной для лабораторных животных (крыс) (Салмина А.Б. и др., 2007). Учитывали также влияние препаратов на выживаемость крыс, регистрируя их гибель в течение 7 дней после операции.

При статистической обработке результатов пользовались t- критерием Стьюдента и парным критерием Стьюдента, критерием Уилкоксона, однофакторным дисперсионным анализом, критерием Манна-Уитни (пакет программ BIOSTAT для статистического анализа).

Результаты и обсуждение

Особенности психотропной активности естественных адаптогенов. Мелаксен, тонизид и билобил обнаруживали психотропные свойства, которые оказывались выраженными по-разному. При остром и хроническом введении мелаксена отмечалось усиление двигательной и исследовательской активности крыс в ОП. Так, через 24 часа после его введения значимо увеличилось количество пересеченных сегментов (31,7±1,1 утром и 33,7±0,8 вечером) и вертикальных стоек (5,5±0,6 и 10,2±1,3 при утренних и вечерних определениях соответственно) по сравнению с контрольными животными. Данный эффект препарата нарастал и к концу исследования достигал своего максимума.

Эффекты билобила в ОП выглядели следующим образом: активирующий эффект вещества усиливался, но тем не менее уступал по выраженности действию мелаксена. Тонизид вызывал резкий подъем двигательной активности в ОП. За весь период наблюдений активирующий эффект нарастал и при утренних инъекциях препарата проявлялся отчетливей, чем при вечерних.

Исследованные вещества обладали мнемотропными свойствами (рис.). Эффект мелаксена более отчётливее проявлялся при вечернем тестировании, когда латентный период ответа прогрессивно возрастал по мере повторных инъекций, и уже к 3-му дню различие с утренними определениями принимало статистически значимый вид (Р<0,01). Билобил, уступая гормональному препарату по эффективности, тем не менее, достоверно улучшал память крыс в первые три дня определений. Это действие несколько слабее было выражено утром. Тонизид в отличие от мелаксена и билобила при остром введении оказывался менее эффективным, улучшая память спустя трое суток (в утренней группе) от начала введения данного препарата и достигая максимума к седьмым суткам.

Рис. Влияние физиологического раствора (1), мелаксена (2), билобила (3) и тонизида (4) на латентный период реакции пассивного избегания в разное время суток.

Примечания: А – через 24 часа, Б – через 72 часа, В – через 7 суток,* – достоверный сдвиг по отношению к контрольным животным и + - при сравнении результатов утренних и вечерних серий, один, два и три значка – соответственно для Р<0,05; 0,01 или 0,001 (t- критерий Сьюдента).

Под влиянием мелаксена в ПКЛ возрастала исследовательская активность, судя по увеличению числа вертикальных стоек и свешиваний с горизонтальной платформы. Частота обоих показателей прогрессивно повышалась в ответ на его повторные введения, уже на 3-й день приобретая достоверный характер. Как и в случае других поведенческих сдвигов, более выраженные изменения наблюдались при вечернем тестировании. Как показал анализ элементов тревожно-фобического поведения в ПКЛ, мелаксен и тонизид ограничивали тревожность крыс.

Различие между исследованными препаратами, как и у интактных животных, прежде всего, состояло в неодинаковой выраженности нарушений на протяжении суток: под влиянием мелаксена они в меньшей степени проявлялись в вечерние, для тонизида же менее уязвимы, напротив, были утренние часы.

Влияние мелаксена, тонизида и билобила на последствия ГИ и ЧМТ. Как ЧМТ, так и ГИ сопровождались существенными поведенческими расстройствами и неврологическим дефицитом, отличавшимися большей выраженностью при инсульте. В посттравматический период такие сдвиги постепенно ослабевали, однако полного восстановления не наблюдали и спустя неделю после вмешательства. Изучаемые вещества действовали неодинаково на фоне разных видов органического повреждения мозга. При ЧМТ ограничение неврологического дефицита под действием веществ произошло лишь к концу эксперимента - мелатонин снизил его на 76% (с 5,4 до 1,3 баллов), а тонизид на 58% (до 2,3 баллов); в то же время при ГИ неврологический дефект под влиянием мелатонина уменьшился на 90,5% (с 12,6 до 1,2), тонизида - на 76,2% (до 3 баллов). Такая же тенденция прослеживается и при влиянии веществ на двигательную активность животных. Под действием тонизида при ГИ уже в первые сутки после операции горизонтальная двигательная активность возросла с 1,3±0,5 до 12,6±0,9 (Р<0,001), тогда как при ЧМТ локомоция усилилась лишь к седьмым суткам (с 3,6±0,5 до 7,3±2,4; Р<0,001), и стабилизации состояния добиться не удавалось.

При оценке влияния адаптогенных препаратов на выживаемость крыс с ГИ выявлено, что в группах, получавших мелаксен и тонизид, летальных исходов не зарегистрировано. При применении билобила погибло 20% животных как в утренних, так и в вечерних сериях.

Одновременно с восстановлением поведения крыс через сутки после ЧМТ вещества ограничивали выраженность неврологических нарушений. Спустя 24 часа они ослабевали вдвое, а к концу недели - почти полностью исчезали. Необходимо отметить, что в утренней серии опытов эффекты тонизида проявлялись сильнее, вечером же лучше действовал мелаксен.

Таким образом, резюмируя представленные сведения, можно констатировать существование у исследованных препаратов достаточно сложного набора психотропных и хронотропных свойств, включая противотревожный, психотонический, антидепрессивный эффекты. Все они, отличаясь адаптогенным характером, в своей совокупности, безусловно, направлены на оптимизацию поведения в целом и более успешное приспособление организма к неблагоприятным факторам внешней и внутренней среды. Тем не менее выраженность отдельных слагаемых психофармакологического профиля у отдельных препаратов заметно варьирует.

Кроме того, исходя из приведённых фактов, можно констатировать протективное действие адаптогенных препаратов в отношении острых проявлений как ГИ, так и ЧМТ. Нейропротективные возможности мелаксена и тонизида при органической церебральной патологии базируются, по-видимому, на единых нейрохимических механизмах. Защита повреждённого мозга адаптогенными препаратами представляет собой комплексный феномен, складывающийся в первую очередь из ограничения оксидантного стресса, антиапоптозного и иммуномодулирующего действия, нормализации энергетического обмена и функции нейромедиаторов (см. Арушанян Э.Б., Бейер Э.В., 2009; Esposito E., Cuzzocrea S., 2010; Reiter R.J. et al., 2007). Вместе с тем, исследованные препараты различались и по своей хронотропной активности. При меньшей тяжести вечернего поражения мозга тонизид гораздо успешнее ослаблял поведенческие и неврологические расстройства в случае использования утром. Что касается большей активности мелаксена в конце светового дня, то причину этого, по-видимому, следует искать в особенностях выработки естественного мелатонина эпифизом. Согласно общеизвестным сведениям, секреция гормона железой у человека и животных различных видов происходит в тёмное время суток (Арушанян Э.Б., 2007). В вечерние часы, когда этот процесс уже начинает постепенно нарастать, эффект экзогенно вводимого мелатонина в форме мелаксена, очевидно, суммируется с прогрессирующим подъёмом плазменной концентрации естественного гормона, что может определять и более выраженный фармакологический ответ.

Выводы:

1. 
   Естественные адаптогенные препараты обладают сравнительно широким спектром психотропной активности, выраженность которой зависит от фактора времени.
   
2. 
   На моделях острой церебральной нейропатологии (ГИ и ЧМТ) у изученных средств обнаружены нейропротективные свойства разной степени выраженности, которые также зависят от фазы суточного цикла. Мелаксен лучше действует при вечернем введении, тонизид же при утреннем.
   

Литература

1. 
   Арушанян Э.Б. Уникальный мелатонин. Ставрополь. 2007. 400 с.
   
2. 
   Арушанян Э.Б., Бейер Э.В. Ноотропные свойства препаратов Гинкго Билоба. Экспер. и клин. фармакол., 71(4), 57-63 (2008).
   
3. 
   Арушанян Э.Б., Бейер Э.В. Растительные адаптогены. Ставрополь. 2009. 231 с.
   
4. 
   Белошицкий В.В. Современные принципы черепно – мозговой травмы в эксперименте// Нейронауки: теоретические и клинические аспекты. – 2005. - № 1. – С. 81-87.
   
5. 
   Макаренко А.Н., Косицин Н.С., Пасикова Н.В. Метод моделирования локального кровоизлияния в различных структурах головного мозга экспериментальных животных // Журн. высш. нервн. деят.-2002.-№ 52 (6).-С.765-768 .
   
6. 
   Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых лекарственных веществ / Под редакцией Р.У. Хабриева. – Москва. – 2005. – 829 с.
   
7. 
   Салмина А.Б., Шнайдер Н.А., Михуткина С.В. и др. Изменение активности АДФ-рибозилциклазы в клетках нервной системы коррелирует с развитием постишемической когнитивной дисфункции // Международн. неврол. журн.-2007.-№ 1 (11).
   
8. 
   Esposito E., Cuzzocrea S. Antiinflamatory activity of melatonin in central nervous// Curr. Neuropharmacol.- 2010.-№.8.-P.228-242.
   
9. 
   Reiter R.J. , Tan D.X., Manchester L.C. Melatonin defeats neurally-derived free radicals and reduces the associated neuromorphological and neurobehavioral damage// J. Physiol. Pharmacol.- 2007.-V. 58.-P. 5-22.
   
10. 
    Sánchez-Barceló E.J., Mediavilla M.D., Tan D.X., Reiter R.J. Clinical uses of melatonin: evaluation of human trials // Curr Med Chem.- 2010.-V.17(19).-P.2070-95.
    

УДК:616.5-001.41:615.322.015.4.3

М.В. Походенко

Влияние биологически активного препарата на основе аКтивированНой эмбрионально-яичной массы на динамику репаративного процесса при кожных повреждениях у стареющих крыс

ГБОУ ВПО «Ставропольская государственная медицинская академия»

Министерства здравоохранения РФ,

Ставрополь, Россия

Старение в большинстве случаев связывают с нарушением адаптивных и гомеостатических механизмов, сопровождаемым высокой чувствительностью к внешним и внутренним стрессам [5, 6]. В процессе старения в организме значительно снижается интенсивность синтетических процессов, что отражается на качестве и скорости течения восстановительных процессов [4, 8]. В старости повышается риск возникновения осложнений при повреждениях [1, 2, 7], что обусловлено как сопутствующей соматической патологией [3, 4], так и общим снижением адаптационных механизмов. Приведенные выше факты определяют актуальность исследований по изысканию путей стимуляции регенераторных процессов в стареющем организме.

В связи с вышеизложенным представляет интерес изучение морфологических особенностей регенераторного процесса поврежденной кожи у животных старческого возраста. Исследование проведено на белых лабораторных крыс линии Wistar заключительного этапа онтогенеза. Для этого было создано 2 группы (по n=30). Животным обеих групп скарифицировали кожу в области загривка. В первой группе применяли официнальный препарат - мазь «Заживин», во второй - разработанный нами препарат «Биокомфорт», в основе которого лежит эмбрионально-яичная масса и фитоэкстракты. Животные выводились из эксперимента на 2, 4, 10 сутки.

Для гистологического исследования были взяты биоптаты из раневого дефекта. Материал фиксировали в 10% нейтральном забуференном растворе формалина. Резку осуществляли на микротоме «ТЕХНОМ МЗП-1003» (Россия) и при помощи замораживающего устройства «ТЕХНОМ ОМТ 0228» (Россия) при температуре минус 8…14^ºС. Срезы наклеивали на стекла, окрашивали гематоксилин-эозином и по Ван-Гизону. Окрашенные срезы заключали в бальзам.

В результате проведенных исследований выявлено, что на вторые сутки опыта у крыс, которым применяли препарат «Биокомфорт», эпидермис в области скарификата слущен. Среди уцелевших клеток эпителия отмечаются клетки крови. В сетчатом слое дермы определяются довольно крупные очаги лейкоцитарной инфильтрации и формирующиеся очаги некроза, что может свидетельствовать о наличии воспалительной реакции, которая заметна и при макроскопической оценке вокруг скарифицированной раны. Аналогичная картина прослеживается и у крыс при использовании препарата «Заживин».

На четвертые сутки опыта у животных, которым применяли препарат «Биокомфорт», в базальном слое эпидермиса, прилежащем к раневой поверхности, наблюдается увеличение числа двуядерных клеток по сравнению со вторыми сутками. Сосуды сосочкового слоя дермы умеренно гиперемированы. Плотность расположения клеточных элементов в сосочковом слое дермы возрастает по сравнению с таковой на вторые сутки опыта, особенно это отчетливо видно по границе с базальной мембраной и в периваскулярной зоне, где увеличивается число мононуклеаров. В реактивном состоянии также находятся сосуды сетчатого слоя дермы, что свидетельствует об активной реакции сосудистого бассейна дермы, обеспечивающей защитные свойства кожи как органа в целом.

У животных, которым применяли препарат «Заживин», на четвертые сутки опыта по краям повреждения в эпидермальном слое обнаружены очаги некроза, межклеточные промежутки в эпидермисе расширены, базальная мембрана нарушена, клетки базального слоя - уплощенной формы. В соединительной ткани дермы кровеносные сосуды кровенаполнены.

К десятым суткам опыта у крыс, которым применяли препарат «Биокомфорт», происходит наползание эпидермиса к центру скарификата, по краям повреждения определяются характерные для восстановившегося эпидермиса слои, толщина эпидермального слоя визуально больше, чем в неповрежденной коже. В клетках базального слоя обнаруживается большое количество митозов. Клеточный компонент сосочкового слоя дермы представлен различными клетками с внешними признаками фибробластов, гистиоцитов, тучных клеток и мононуклеаров, что может свидетельствовать об активности пластических и обменных процессов в регенерирующей коже [3].

Под влиянием препарата «Заживин» на десятые сутки у крыс область раны по центру покрыта коркой, эпидермис в этом месте раневой поверхности отсутствует, а по краям повреждения истончен. Только у 10 животных наблюдается более выраженный процесс эпителизации по краям дефекта.

Таким образом, оценка воздействия препарата «Биокомфорт» на кожу в процессе репаративной регенерации в сравнении с официнальным препаратом «Заживин» свидетельствует о четкой положительной динамике на протяжении срока наблюдения изучаемых показателей, наиболее активно и раньше проявляющейся в группе, где использовали новый препарат.

Литература

1. 
   Коргунова, Р.В. Инволюционные изменения кожи и их коррекция с применением комплекса протеогликанов и каротиноидов: автор. дисс. … канд. мед. наук: 14.00.11 / Р.В. Коргунова. – М., 2005. – 19 с.
   
2. 
   Курилов, И.Н. Морфологические особенности репаративного процесса эксцизионных ран кожи у старых животных при действии пептидных биорегуляторов / И.Н. Курилов // Успехи геронтол. – 2009. – Т. 22. – № 3. – С. 414–417.
   
3. 
   Мяделец, О.Д. Морфофункциональная дерматология / О.Д. Мядлец, В.П. Адаскевич. – М.: Медлит, 2006. – 261 с.
   
4. 
   Смирнова, И.О. Функциональная морфология старения кожи / И.О. Смирнова // Успехи геронтологии. – 2004. – № 13. – С. 44-51.
   
5. 
   Трофимов, А.В. Функциональная морфология старения / А.В. Трофимов // Успехи геронтологии. – 2009. – Т. 22. – № 3. – С. 401-408.
   
6. 
   Хавинсон, В.Х. Избранные лекции по геронтологии / В.Х. Хавинсон, С.С. Коновалова. – СПб.: Изд-во «Прайм-ЕВРОЗНАК», 2009. – 896 с.
   
7. 
   Швецова, Е.В. Патофизиологические механизмы регенерации кожи под действием мезенхимальных клеток: автореф. дисс. … канд. мед. наук: 14.00.16 / Е.В. Швецова. – Москва, 2009. – 23 с.
   
8. 
   Auger, F.A. Skin substitutes and wound healing / F.A. Auger, D. Lacroix, L. Germain // Skin Pharmacol. Physiol. – 2009. – № 22 (2). – Р. 94–102.
   
9. 
   Походенко М.В., Тимченко Л.Д.
   

Pohodenko M.V.

INFLUENCE OF BIOLOGICALLY ACTIVE PREPARATION ON THE BASIS ACTIVITY OF EMBRYONIC AND EGG WEIGHT ON REPARATION DYNAMICS OF PROCESS AT SKIN DAMAGES AT GROWING OLD RATS

Considering that in an old age skin is most subject to external influence of adverse factors, new biologically active preparation "Biokomfort" whom applied on skin on a skarification site of skin is developed. The indicators reflecting features of influence of a preparation on reparation regeneration of skin in an old age compared to the values of the same indicators established at animals which applied "Zazhivin's" ofitsinalny preparation. The assessment of influence of a preparation "Biokomfort" on skin in the course of reparation regeneration in comparison with "Zazhivin's" ofitsinalny preparation testifies to accurate positive dynamics throughout term of supervision of studied indicators, is the most active and before being shown in group where used a new preparation.

Keywords: old age, reparation regeneration of skin, biologically active preparation.

УДК 614.48:615.014.456:612.014.464

О. А. Романенко¹, Л.С. Катунина²

ЭФФЕКТИВНОСТЬ СТЕРИЛИЗАЦИИ ГИДРОЛИЗАТОВ ИЗ БАНАНОВ И ОТРУБЕЙ МЕТОДОМ ОЗОНИРОВАНИЯ

¹ФГАОУ ВПО «Северо-Кавказский федеральный университет»,

²ФКУЗ «Ставропольский научно-исследовательский

противочумный институт»,

Ставрополь, Россия
На сегодняшний день гидролизаты из биологического сырья получили достаточно широкое распространение в косметологии, медицине в качестве основы и компонентов в различных биопрепаратах, а также в микробиологии как компонент питательных сред или стимуляторов роста микроорганизмов [1,2,6]. В микробиологии отдают предпочтение использованию ферментативных гидролизатов, так как благодаря процессу гидролиза микроорганизмы получают питательные вещества в более доступной форме. Питательные свойства гидролизатов зависят от метода гидролиза и от свойств сырья, которые и обеспечивают питательные потребности микроорганизмов [3]. Достаточно часто для гидролиза используется сырье растительного происхождения, которое часто обсеменено различными патогенными микроорганизмами, что может приводить к загрязнению гидролизатов.

Традиционно готовые гидролизаты стерилизуют с помощью тиндализации, автоклавирования, добавления хлороформа. Однако тиндализация является довольно длительным по времени процессом, автоклавирование зачастую приводит к выпадению гидролизатов в осадок вследствие их белковой природы, а хлороформ ингибирует рост культивируемых микроорганизмов при добавлении гидролизатов в питательную среду [5].

Имеются также альтернативные методы стерилизации, такие как озонирование. Озон, являясь сильным окислителем, широко применяется в медицине, в промышленности, в быту, уничтожая большинство известных болезнетворных микроорганизмов [4]. Данный метод требует незначительной дозировки, прост, экономичен, безопасен. Но, к сожалению, на сегодняшний день не разработаны рекомендации по стерилизации гидролизатов с помощью озонирования.

Данный метод стерилизации был использован нами для обеспложивания ферментативных гидролизатов из бананов и отрубей, приготовленных в лаборатории ПНИЛ иммуноморфологии, иммунопатологии и иммунобиотехнологии и рекомендуемых к использованию в качестве стимуляторов роста лептоспир.

Для озонации ферментативных гидролизатов из бананов и отрубей использовали бытовой озонатор марки «Гроза» производства ООО «Дон», город Томск.

Из готовых гидролизатов были взяты пробы, которые были подвергнуты озонированию в течение 10, 20, 30 и 40 минут (с выходом озона – 300мг/час). На чашки Петри с агаром Хоттингера были сделаны посевы проб гидролизатов до и после озонирования.

Результаты исследований показали, что пробы гидролизатов сразу после изготовления, до озонирования, на чашках Петри обеспечили сплошной рост мелких колоний микроорганизмов желтоватого цвета. Было выделено 2 типа микроорганизмов – Staphylococcus aureus и Serratia marcescens. При обработке проб гидролизатов озоном в течение 10 минут сплошной рост мелких колоний микроорганизмов сохранился. При озонировании в течение 20 минут установлен рост лишь отдельных колоний вышеперечисленных микроорганизмов. Через 30 минут исчезли колонии стафилококка, и выросло лишь несколько колоний Serratia marcescens, после обработки в течение 40 минут посевы на чашках Петри не показали роста микрофлоры.

Таким образом, на примере ферментативных гидролизатов из бананов и отрубей была доказана эффективность стерилизации методом озонирования вне зависимости от вида растительного сырья. Оптимальным временем стерилизации является сорокаминутное воздействие озоно-кислородной смесью.