Leyla Alı qızı Mehdibəyli

Praymer 

PZR üçün rea

ksiya şəraiti, müddəti  Tsikllərin sayı 

5-HTT 

– F 

5-HTT 

– R  

95

o 

C, 2' 

1 

95

o 

C, 1' 

62

o 

C, 1' 

72

o 

C, 1' 

35 

72

o 

C, 10' 

1 

5-HT2A 

– F – 1  

5-HT2A 

– R – 1 

94

o 

C, 5' 

1 

94

o 

C, 1' 

58

o 

C, 1' 

72

o 

C, 2' 

35 

72

o 

C, 10' 

1 

5-HT2A 

– F – 2  

5-HT2A 

– R – 2 

94

o 

C, 5' 

1 

94

o 

C, 30 san. 

58

o 

C, 45 san. 

72

o 

C, 45 san. 

40 

72

o 

C, 10' 

1 

 

 

 

 

 

---

48 

 

C

ədvəl 2.3  

PZR üçün reaksiya qarışığının tərkibi 

S/N 

Reaktivlər  

1 

nümunə  üçün  götürülən 

həcm 

İlkin qatılıq  Son qatılıq  

1 

Reaksiya buferi  2,5 µl 

10 X 

1X 

2 

dNTP 

0,5 µl 

10 mM 

0,2 

μM 

3 

MgCl

2

 

1,5 µl 

25 mM 

1,5 mM 

4 

F - Praymer 

0,8 µl 

100 

μM 

3,2 

μM 

5 

R - Praymer 

0,8 µl 

100 

μM 

3,2 

μM 

6 

H

2

O 

5,7 µl 

dd H

2

O  

 

7 

Taq  

DNT-

polimeraza 

0.2 µl 

5 U/ 

μl 

0.04 U/ 

μl 

8 

DNT 

13 µl 

50 

ng/μl 

26  ng/µl 

 

2.5.  PZR m

əhsullarının elektroforetik analizi 

Aqaroza  v

ə  poliakrilamid  gelində  həyata  keçirilən  elektroforez  metodu 

DNT  fraqmentl

ərinin  ayrılması,  identifikasiyası  və  təmizlənməsi  üçün  istifadə 

edil

ən  standart  metoddur.  Yuvalara  yerləşdirilən  1-10  ng  DNT  ultrabənövşəyi 

i

şıqda gelin birbaşa yoxlanılması ilə aşkar edilə bilər.

 

Bu

fer məhlulda molekullar 

elektrik y

ükünə malik olur, yükün qiyməti və işarəsi isə mühitin pH–dan asılıdır. 

Məhluldan  elektrik  cərəyanı  buraxdıqda  onda  istiqamətlənmiş  elektrik  sahəsi 

əmələ gəlir. DNT fraqmentlərinin ayrılması onların yüklü olması səbəbindən baş 

verir.  Elektrik  sah

əsinin  təsiri  altında  makromolekullar  özlərinin  ümumi  yükünə 

---

49 

 

müvafiq  olaraq  katod  v

ə  ya  anoda  doğru  hərəkət  edirlər.  Nukleotidlərin  fosfat 

qalıqları  hesabına  bütövlükdə  DNT  mənfi  yüklü  olur.  Bu  səbəbdən  DNT  suda 

h

əll  olur  və  müsbət  elektroda  cəzb  olunur.  Aqaroza  gelində  kiçik  ölçülü 

molekullar böyük molekullara nisb

ətən sürətlə hərəkət edir. 

PZR  m

əhsullarının  elektroforetik  analizi  üçün  aqaroza  gelində  aparılan 

elektroforez  metodundan  istifad

ə  olunur.  Tədqiqat  işində  bu  məqsədlə  1,5%-li 

aqaroza gelind

ən istifadə edilmişdir. Gelin hazırlanması üçün 1,5 q aqaroza, 2ml 

TAE  50X  elektroforez  buferi  (c

ədvəl  2.3)  və  98  ml  dH

2

O  istifad

ə  edilmişdir. 

Nümun

ələri  gelin  yuvacıqlarına  daxil  etməzdən  əvvəl  15μl  PZR  məhsulunun 

üz

ərinə 3μl rəngləyici məhlul olaraq bromfenol göyü (50%-li qliserol, 1%-li SDS, 

EDTA 0,1 M, 0,5 mg/ml q) 

əlavə edilib qarışdırılır. Elektroforez sabit gərginlikdə,  

100 V-da h

əyata keçirilir.  

 C

ədvəl 2.4   

TAE 50X elektroforez buferinin t

ərkibi 

Bufer 

Tərkibi 

Miqda

rı (1l üçün) 

Mühit 

TAE 50X 

Tris base (MW= 121.1) 

Glacial Acetic Acid 

EDTA 0,5 M 

242 g 

57,1 ml 

100 ml 

pH  

8,0 

 

Miqrasiyadan  sonra  gel  t

ərkibində  etidium  bromid  -  2  μg/ml  olan  su 

vann

asında  30  dəq  müddətində  inkubasiya  olunur.  Etidium  bromid  molekulu 

ultrab

ənövşəyi şüaların təsirindən flüoressensiya etmək qabiliyyətinə malikdir ki, 

bu da DNT molekulunun geld

ə vizualizasiyasına şərait yaradır. Tədqiqat işində 

etidium  bromid  vannas

ında  rənglənmiş  aqaroza  gellərinin  şəkilləri  Gel 

Documentation System apa

ratında çəkilmişdir. 

---

50 

 

DNT  fraqmentl

ərinin  miqrasiya  məsafəsi  onların  təşkil  olunduqları 

nukleotid  cütl

ərinin  sayının  loqarifminə  tərs  mütənasibdir.  Beləliklə  də, 

fraqmentin ölçüsü m

əlum standartların ölçüsü ilə müqayisə vasitəsilə təyin edilir. 

T

ədqiqat  işində  PZR  məhsulların,  sintez  olunmuş  amplikonların  ölçüsünü  təyin 

etm

ək üçün 1kb DNT markerdən istifadə olunmuşdur.