Guruh talabasi ning biorganik kimyo fanidan amaliy mashg’uloti namangan 2023

4-Mavzu: Oqsillarni tabiiy manbalar (sut, tuxum, qon zardobi)dan ajratib olish


4-ish
Immunoglobulinlarni qon zardobidan ajratish


Ishning umumiy izoshi. Hayvon (odam) qoni zardobidan 50% to`yinish darajasida ammoniy sulfat bilan cho`ktirish yo`li orqali immunoglobulinlar qismi cho`ktiriladi, ortiqcha tuzni chiqarib yuborish uchun dializ qilinadi va imkoniyat bo`lsa liofillab quritiladi.
Jihozlar va reaktivlar. 50 ml stakanlar – 2 dona, sentrifuga (vakuum-filtrlagich qurilmasi), SF-26, ammoniy sulfat, 10 ml qon zardobi, dializ membranasi, shajmi 1 l bo`lgan dializ uchun kamera.
Ishning borishi. SHayvon va odam qon zardobining immunoglobulinlari oqsillarning geterogen sinfidan iboratdir (lgA, lgM, lgD, lgE, lgG). Ular antitelalar shisoblanadi – «antigen»lar – organizmda begona molekulalar paydo bo`lganida unga qarshi ishlab chiqariladigan moddalardir.
Antitela o`ziga mos kelgan o`ta moyillik bilan sezib, «uni» bog`lab oladi va antigenni neytrallashga, shamda yo`qotishga moslaydi.
+on zardobi immunoglobulinlarining asosiy massasi lgG dan iborat bo`lib, cho`kmaga 33-50 % darajada ammoniy sulfat tuzi bilan to`yintirilganda tushadi. 10 ml qon zardobiga aralashtirilib turib, asta-sekin 3,13 g ammoniy sulfat tuzi qo`shiladi. Aralashma cho`kma shosil qilishligi uchun 30-40 min qoldiriladi. Globulinlar cho`kmasida 15 minut davomida 3-5 ming aylmin. sentrifugalanib yoki filtralanib ajratiladi, zardobning dastlabki shajmidagi suv bilan eritiladi va 2 marotaba 1 l suvda (1-2 soatdan), 1 marotaba pH 7,4 bo`lgan 10 mmol’ natriy fosfat buferida (1 soat) dializlanadi.
Fraktsiyalarning tozalik darajasini oshirish maqsadida qaytadan cho`ktirish odatdagidek olib boriladi. So`ngida ammoniy sulfat bilan cho`ktirilgan va buferda dializlangan cho`kma imkoniyat bo`lsa liofillangan sholda quritiladi.
Eritmani 260 va 280 nm dagi optik zichligi o`lchanadi va lgG ning kontsentratsiyasi shamda miqdori aniqlanadi. Globulinlar cho`kmasi ajratib olingandan so`ng cho`kma ustidagi suyuqlik yoki filtrat yig`ib olinadi va albumin ajratish uchun ishlatiladi.
Agarda immunoglobulinni elektroforetik marker sifatida ajratish vazifasi ko`yilsa, u sholda, globulinlarning dializlangan fraktsiyasi (50 %-li to`yintirish bilan cho`ktirilgan) 33-34 %-li to`yintirish bilan cho`ktiriladi (2-jadval, 46 b.ga qarang) va dializlash jarayoni yuqorida bayon etilganidek qaytariladi.