Ouchterlony double diffusion

Addition of antigen to wells 

7. 

Prepare standard antigen dilutions as given above. 

8. 

Add 200 pl of standard antigen, test samples and IX wash buffer to the coated wells (in duplicates). 

9. 

Incubate at room temperature for 30 minutes. 4 

10. 

Discard the well contents; fill the wells with IX Wash buffer, allow it to stand for 3 minutes) discard 

the contents. Repeat this step twice. 

 

a to h - Various dilutions of standard antigen 

Tl , T2 and T3 - Three test samples 

B - IX wash buffer (Blank) Addition of HRP labeled antibody 

11 . Dilute 5 VI of Antibody-HRP conjugate with 5 fnl of sample diluent. 

12. 

Add 200 VI of HRP labeled antibody to all the wells. 

13. 

Incubate at room temperature for 30 minutes. 

14. 

Discard the well contents and rinse the wells 3 times with Wash buffer. 

---

RUAS  

 

Department of Biotechnology (2021-22) 

Immunology and Molecular Biology Laboratory