Ouchterlony double diffusion

Day 1: Coating of wells with Capture antibody 

1. 

Dilute 60ul of capture antibody with 5.94 mf of ready to use coating buffer. Concentration of the 

capture antibody is 10pg/ml. 

2. 

Pipette 200 ul of diluted (1 X) capture antibody into each of the 24 wells of the microtitre plate. 

Gently shake the plate for an even distribution of the capture antibody over the bottom of each 

well. 

3. 

Incubate the microtitre plate overnight at 4

0

C. 

Day 2: Blocking of the residual binding sites

 

4. 

After discarding the well contents rinse the wells with distilled water for three times by draining 

out the water after each rinse. 

5. 

Add 200 ul of blocking buffer to each well and incubate at room temperature for 1 hour. 

6. 

Rinse the wells three times with distilled water. Each time discard out the water completely by 

tapping the plate on a blotting paper.