KLİNİK İmmunolojide hastaliğin tanisi iÇİN

Antikorlar en sık fluoresin isotiyosiyanat (FITC) ile işaretlenir. BUNA GÖRE;

•  Direk fluoresan antikor (DFA)
•  Katı fazda klinik örnek (Ag)
•  Üzerine FITC’li Ab
•  Pozitif sonuç (fluoresan-yeşil görüntü)
•  Bakteri ve viruslerin hızlı tanıda
• ♣ Kuduzda negri cisimciği
• ♣ Kolera tanısında
•  İndirek fluoresan antikor (İFA)
•  Katı fazda hazır Ag
•  Hasta serumu(aranan Ab)
•  FITC’li Anti-Ig
•  Pozitif sonuç (fluoresan görüntü)
•  Birçok bakteri virus enf ve otoimmun hast.
• ♣ FTA- Abs (T.pallidum)
• ♣ ANA, AMA vb

IF yöntemiyle klinik örneklerden hem Ag hem Ab aranır

Fluoresan mikroskobu olması ve uzman kişi gereklidir

Yöntem aynı IF ve EIA gibidir

• Yöntem aynı IF ve EIA gibidir

• Antikorda işaretliyici madde olarak

•  Radyoaktif madde
•  I. 125 ve I. 132 kullanılır

•  Gamma sayaçlarında değerlendirilir

•  Radyoaktif madde kullanımından dolayı sınırlıdır

•  Özellikle hormon testlerinde (TSH, T3, T4) kullanılır
•  Radyo allergo sorbent (RAST) deneyi
•  Allerjene spesifik IgE tayininde kullanılır
•  Radioimmunosorbent (RIST)
•  Serumda total IgE tayininde

• Antikoru ENZİMLE İŞARETLEME yöntemidir
• Peroksidaz, alkalin fosfataz ve beta galaktozidaz gibi enzimler
• Spesifik substratları renkli ürünlere çevirirler
• Peroksidaz/Orthofenilendiamin
• Alkali fosfataz/Nitrofenil fosfat
• Renkli ürünler spektrofotometrede belirli dalga boylarında olurlar
• Yöntemin;
• Kullanılan reaktifler uzun ömürlü olması
• Artık maddelerle ilgili radyasyon sorunu olmaması
• Uygulamasının basit ve otomatize edilebilmesi yönleriyle
• Aynı prensipli (işaretleme) RIA ve IF’ye göre avantajlıdır

• Dezavantajları ise;
• Antijen saptamada klinik örneğin uygunluğunun değerlendirememesi
• Bazı viral enfeksiyonlarda düşük Ag yoğunluğu saptanmaması
• IgM saptanmasında RF-IgM ile çatışmanın olması
• Bunun için Absorblama işlemi olması

Antijen veya antikorun çeşitli vücut sıvılarında <5pg düzeyinde saptandığı için yüksek ANALİTİK DUYARLILIKTA olması

• Antijen veya antikorun çeşitli vücut sıvılarında <5pg düzeyinde saptandığı için yüksek ANALİTİK DUYARLILIKTA olması
• UYGULAMA PRENSİPLERİ
• Ag ve Ab (sınıfa özgül) saptayabilir
• Katı faz olarak;
• Plastik tabanlı mikrotitrasyon plakları
• Boncuk veya filtre kullanılır

Ag kaplı kuyucuk

• Ag kaplı kuyucuk

• Hasta serumu (Aranan Ab)

• Yıkama

• Enzim işaretli ikincil Ab

• Yıkama

• Substrat

• H2SO4 (Reaksiyonu durdurur)

• Spektrofotometre

Katı yüzeyde capture monoklonal yada poliklonal

• Katı yüzeyde capture monoklonal yada poliklonal

• Ag içeren hasta serum örneği

• Yıkama

• Enzimle işaretli saptayıcı monoklonal yada poliklonal

• Yıkama

• Substrat

• H2SO4 (Reaksiyonu durdurma)

• Spektrofotometrede okuma

Katı yüzeyde capture Ab

• Katı yüzeyde capture Ab

• Ag içeren hasta serum örneği

• Yıkama

• Spesifik bir saptayıcı antikor ilave edilir antijene bağlanır

• Ag iki antikor arasında kalır

• Enzimle işaretli ikincil Ab saptayıcı antikora Fc bölgesinden bağlanır

• HRP ile işaretli

• Yıkama

• Substrat

• H2SO4 (Reaksiyonu durdurma)

• Spektrofotometrede okuma

• 4) YARIŞMACI (KOMPETATİF)ELISA:
• Serumda Ag Arama (Sıklıkla kullanılır)
• Katı yüzeyde Ab
• Şüpheli serum (Ag aranan klinik örnek) ve enzimli işaretli antijenin beraber konulduğu antijen rekabet (Competetive) yöntemidir.
• İşaretli antijen katı yüzeye bağlanırsa, substratla da birleşir RENK OLUŞUR.
• Bu sonuç klinik örnekteki Ag’nin olmadığı bir sonuçtur.
• Fakat klinik örnekteki antijen katı faza bağlanırsa enzim olmadığından substratla reaksiyon olmaz. RENK OLUŞMAZ.

• 5) YAKALAMALI (CAPTURE)ELISA:
• Sıklıkla;

•  Enfeksiyoz etkene yönelik,

•  Spesifik IgM ve IgG saptama testidir

• 1)Spesifik Ag saptama  Katı faza poliklonal veya M.ab’lar konulur  Poli Ab’ler,

•  M Ab’lere göre
•  Farklı Ag epitoplarını
• bağladığı için güvenilirdir

•