2.2. Nishonlangan droteverinni YuQX usuli yordamida tozalash. Furosemidning nishonlangan preparatini yon mahsulotlardan tozalash geksan: aseton (1: 1) sistemasida Silufol (Chexoslovakiya) bilan pllastinalar ustida yupqa qatlamli xromatografiya usuli orqali amalga oshirildi. Nishonlashdan so’ng biz furosemid preparatining rangi o’zgarishini kuzatdik - jigarrang paydo bo’ldi. Nishonlangan preparatni silikagelda ajratganda, biz Rf = 0,42 bo’lgan qo’shimcha fraktsiyaning ko’rinishini ham topdik. Bularning barchasi termal faollashtirilgan tritiy bilan nishonlash jarayonida furosemidning kuchli distruksiya kuzatilganidan dalolat beradi.
8-rasm – Tritiy bilan nishonlangan furosemide preparatini geksan: asetonda sistemada YuQX usuli yordamida tozalash(1:1).
Silikagelli plastinkada furosemid fraksiyalari dog’lari bo’lgan joylar kesilib, ulardan silikageli olib tashlandi va fraktsiyalar aseton bilan tozalandi. Fraksiyalar quruq bo’lguncha quritilgan va tortilgan. Fraksiyalarning radioaktivligi RZhS-05 hisoblagichida toluol sintillyatsion kokteylda (1 litr toluolda 4 g PPO va 0,05 g POPOP) suyuqlik ssintilatsiyasini hisoblash orqali aniqlandi. Ma’lumotlar 3-jadvalda keltirilgan.
3-jadval - yupqa qatlamli xromatografiya bilan ajratilgandan so’ng furosemidning tritiy bilan nishonlangan preparati va destruksiya mahsulotlari radioaktivligi keltirilgan.
Fraksiya radioaktivligi Bk (umumiy radioaktivlik %) = 4.681.000 Bk)
Fraksiya radioaktivligi soni Bk/mg
Fraksiya 1
(start)
0,52 mg (17,33%)
88.300 Bk (5,04%)
169.807 Bk/mg
Fraksiya 2
0,42 mg (14,0%)
282.620 Bk (16,15%)
672.904 Bk/mg
Fraksiya 3
(furosemid)
1,08 mg (36,0%)
269.500 Bk
(15,40%)
249.537 Bk/mg
Fraksiya 4
(front)
0,98 mg (32,67%)
1.109.960 Bk
(63,41%)
1.132.612 Bk/mg
Tozalangandan furosemidni YuQX da dastlabki sistema yordamida qaytadan tekshirildi.
9-rasm - Tozalangan furosemidni YuQX usulida qayta tozalash xromatogrammasi.
Olingan tozalangan furosemid preparatining o’ziga solishtirma radioaktivligi 249,537 Bq / mg, o’ziga solishtirma molyar radioaktivligi 82,471,979 Bq / mmol = 82,47 MBq / mmol = 2,23 mKu / mmol.
Ilgari biz 202 MBq / mmol = 5,46 mKu / mmolning solishtirma molyar radioaktivligi bilan nishonlangan furosemidni oldik.
Biz tritiy bilan nishonlangan preparatda qo’shimcha fraktsiyaning ko’rinishini topdik, bu nishonlash jarayonida furosemidning yo’q qilinishini ko’rsatadi. Tritiy radionuklidini muhim qismi startida (17,33%) va ikkinchi fraktsiyada (14%) (jami 31,33%) topilgan. Tritiy radionuklidining aksariyati YuQX finish qismi bilan ham chiqdi (32,67%). Belgilangan preparatni tozalash uchun YuQX dan foydalanish furosemidni qo’shimcha mahsulotlardan to’liq tozalash imkonini beradi. Tozalangan tritiy bilan nishonlangan furosemid preparatining hosildorligi 36,0% ni tashkil etdi.
Shunday qilib, biz tomonimizdan ishlab chiqilgan usuldan foydalanib, 82,47 MBq / mmol (2,23 mKu / mmol) solishtirma molyar radioaktivligi bilan termal faollashtirilgan tritiy bilan nishonlangan 1,08 mg furosemid olindi. Bu miqdor inson qon albuminining bog’lanish qobiliyatini aniqlash uchun radiokimyoviy usullarni ishlab chiqish uchun etarli.