Ouchterlony double diffusion

Particulars 

Marks 

Maximum 

Actual 

Conduction of Experiment 

 

10 

 

Write up 

 

05 

 

Observation and Result 

 

05 

 

Viva 

 

05 

 

Total 

 

25 

 

 

 

 

 

Signature of Staff Incharge 

 

 

 

---

RUAS  

 

Department of Biotechnology (2021-22) 

Immunology and Molecular Biology Laboratory 

Experiment 2 

ROCKET IMMUNOELECTROPHORESIS 

 

Introduction: 

Rocket Immunoelectrophoresis, also known as electro-immunodiffusion, is a simple, quick and 

reproducible method for determining the concentration of antigen in an unknown sample. This 

quantitative one dimensional immunoelectrophoresis method involves a comparison of antigen 

sample of unknown concentration with a series of dilutions of a known concentration of the antigen 

and requires a monospecific antibody against the antigen under investigation. In this method, 

antigen migrates from the well through agarose gel containing antiserum, forming rocket shaped 

precipitin peaks. The height of this peak is proportional to the concentration of the antigen loaded in 

the corresponding well.  

Aim: 

 

 

 

Principle: 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

---

RUAS  

 

Department of Biotechnology (2021-22) 

Immunology and Molecular Biology Laboratory 

 

Fig 1: The higher the concentration of antigen loaded in the well, the further it will migrate 

through the  gel before it interacts with sufficient antibody to form precipitin peaks  

Materials Required: 

 

 

 

 

Procedure: 

 

 

 

 

 

 

---

RUAS  

 

Department of Biotechnology (2021-22) 

Immunology and Molecular Biology Laboratory 

1. 

Prepare 15 ml of 1 % agarose (as given in important instructions). 

2. 

Cool the solution to 55-60

o

C and add 250 𝜇l of antiserum to 13 ml of agarose solution. Mix well 

for uniform distribution of antibody. 

3. 

Pour agarose solution containing the  antiserum on to a grease  free glass plate placed on a 

horizontal surface.  Allow the gel to set for 30 minutes. 

4. 

Place the glass plate on the template provided. 

5. 

Punch wells with the help of gel puncher. Use gentle suction to avoid forming rugged wells. 

6. 

Add 10 μl of the given standard antigen and test antigen samples to the wells. 

A. 

Standard Antigen A (1.87 mg/ml)  

B. 

Standard Antigen B (0.94 mg/ml)  

C. 

Standard Antigen C (0.47 mg/ml)  

D. 

Standard Antigen D (0.23 mg/ml)  

E. 

Test Antigen 1 F. Test Antigen 2  

7. 

Pour 1X TBE buffer into the electrophoresis tank such that it just covers the gel. 

Note: The remaining 1X TBE buffer can be stored at room temperature. 

8. 

Electrophorese at 80-120 volts and 60-70 mA, until the blue dye travels 3-4 cm from the well. 

Do not electrophorese beyond 3 hours, as it is likely to generate heat. 

 

Observation and Graph : 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

---

RUAS  

 

Department of Biotechnology (2021-22) 

Immunology and Molecular Biology Laboratory 

Result: