Pzr uchun ishchi aralashma (master mix ) tayyorlash va termotsikler (pzr) bilan ishlashni o'rganish. Reaksiya qo'yish

Genom DNKsi konsentratsiyasini aniqlash (spektrofotometr asbobi hamda gel-elektroforez usuli yordamida).
DNK konsentratsiyasini aniqlash
Spektrofotometrik usulda aniqlanishi mumkin bo'lgan DNK kontsentratsiyasining pastki chegarasi 0,1 mkg / ml ni tashkil qiladi. Belgilash uchun odatda sinovdan o'tgan DNK eritmasining alikvotini (lotincha aliquoties - bir nechta qismlar, ko'paytma) oling, masalan, 1 mkL va 100 va undan ko'p marta suyultiriladi.
Keyin eritma konsentratsiyasining olingan qiymati qayta hisoblanadi. Suyultirilgan namunada 10 ng dan ortiq DNK bo'lishi muhim ahamiyatga ega. Taqqoslash uchun kamida 10 ng DNKni o'z ichiga olgan lentani gel elektroforezi bilan ham ko'rish mumkin. DNK namunasida RNK bo'lmasligi kerak.
Kerakli jihoz va reaktivlar
Konsentratsiyasi noma'lum bo'lgan bakteriyalar, qon hujayralari yoki makkajo'xori to'qimalaridan genomik DNK, spektrofotometr, istalgan kelib chiqishi DNK namunasi.
- TE buferidagi noma'lum konsentratsiyali DNK eritmasi.
- 1 mg / ml konsentratsiyasida TE buferidagi lambda fag DNK eritmasi.
Ishning bajarilishi
1. Olingan DNK namunasini mikropipetka bilan tahlil qilish uchun oling va preparatni 100 mM NaCl o'z ichiga olgan 130 ul TE bufer qo'shib suyultiring. Suyuq sirt egriligi o'lchovlarga ta'sir qilmasligi uchun namuna hajmi 130 ll ga teng bo'ladi.
2. Suyultirilgan DNK namunasini "kichik" (100 ul) quduqqa joylashtiring.
3. A260 ning yutilishini o'lchash. Olingan qiymat 0,005-2,5 oralig'ida bo'lishi kerak. Aks holda, DNK suyultirilishi yoki konsentratsiyalangan bo'lishi kerak.
4. Jadvaldan konversiya faktoridan foydalanib DNK kontsentratsiyasini hisoblang. 1 formula bo'yicha: C [mg / ml] = A260 K.
DNK va RNK konsentratsiyasini hisoblash

	K [мкг/мл]	K1:130 [мкг/мкл]
DNK qo’sh zanjirli	50	6,5
DNK bir zanjirli	37	4,81
RNK	40	5,2

5. DNKning oqsillar va polisaxaridlar aralashmalaridan tozalanish darajasini baholash uchun A280 va A235 singishini o'lchash. 260/280 va 260/235 nisbati 1,8 dan katta bo'lishi kerak. Sof DNK uchun A260 / A280 = 1.8-1.9 va A260 / A235 = 2.2-2.5 qiymatlari xarakterlidir. Sof RNK uchun A260 / A280 qiymati = 1,9-2,0 d.

6. MOLBIOL.RU veb-saytining asosiy sahifasini oching (http://www.molbiol.ru). Asosiy sahifada "Hisob-kitoblar" bo'limini toping, "DNK (RNK) konsentratsiyasini spektrofotometrik aniqlash" bandini tanlang va maxsus shakl yordamida namunangiz konsentratsiyasini hisoblang.
Genom (nem. Genom) — xromosomalar (unda joylashgan genlar bilan birga) gaploid toʻplami; individ genetik tuzilishining asosiy elementlari majmui. "G." terminini fanga nemis biologi G. Vinkler kiritgan (1920). Gaplofazada har bir hujayra bitta G.ga, diplofazada esa ikkita G.ga ega boʻlib, zigota hosil boʻlishida ularning biri erkak, ikkinchisi urgʻochi gametalardan oʻtgan boʻladi. G. asosiy genetik va fiziologik sistemalarni oʻzida namoyon qilib, uning genetik jihatdan mukammalligi normal gameta va zigotalarning hosil boʻlish zaminidir. Hayotchan, ammo qisman hosildor poliploid formalar kamida bir juft gomologik G.ga ega boʻlishi shart; qolgan xromosomalar boʻyicha turli chetlanishlar boʻlishi mu.mkin, bu esa rivojlanishga deyarli taʼsir koʻrsatmaydi. Agar konʼyugatsiyalanuvchi (gomologik xromosomalarning yaqinlashuvchi) xromosomalardagi genlarning chiziqli joylashishi aynan oʻxshash boʻlsa, u holda ikkala G. mutlaqo oʻxshash (gomologik) boʻladi. Chala gomologik G.da duplikatsiya (xromosoma uchastkasining ikki hissa ortishi) hamda deleniya (xromosoma uchastkalarining yetishmasligi) natijasida yuz beradigan resiprok translokatsiya (xromosomaning ikki uchastkasi oʻzaro oʻrin almashadi) va inversiya (xromosoma uchastkasi holatining oʻzgarishi) tufayli barcha yoki ayrim konʼyugatsiyalanuvchi xromosomalarning qisman aynan oʻxshashligi kuzatiladi. Segmentli aynan oʻxshashlik bilan xromosoma konʼyugatsiyasining tipi va darajasi, shuningdek urugʻlanish miqdori aniqlanadi. Euploidiya (bir butun G. normal sonining ortishi) va aneuploidiya (xromosomalar sonining xromosomaning karrali normal gaploid toʻplamiga teng boʻlmagan holdagi oʻzgarishi) G.li mutatsiyalarta olib keladi.