Pzr uchun ishchi aralashma (master mix ) tayyorlash va termotsikler (pzr) bilan ishlashni o'rganish. Reaksiya qo'yish

DNK markerlari hamda restriktaza fermentlari bilan ishlashni o’rganish. : kichik hajmli probirkalar, dozator, tayyor markerlar, plazmidalar va restriktazalar, muz, PZR, short.
Genomika va bioinformatika markazida 5-6 ming praymerlar bor. Ular genlarni kartalashtirish uchun kerak.
Restriktsiyalash- restriktaza yoki endonukleaza deb ataluvchi fermentlar yordamida DNK molekulasini spetsifik bo’laklarga bo’lish.
DNK molekulasining 5¹ uchida fosfat, 3¹ uchida gidroksil gruppa bo’ladi. Har bir restriktaza o’zining aniq taniydigan restriktsiya saytiga ega.
Restriktazalar 2 xil kesadi.
1. Yopishqoq uchlar hosil qilib (EcoRI, Hind III);
2. To’mtoqlar uchlar hosil qilib (Hae III).
Restriktsiya mexanizmlarini o’rganishning ahamiyati:

• 
  Restriktsiya mexanizmlarini o’rganish genetik tadqiqotlarni ancha soddalashtirdi.
  
• 
  Restriktsiyalash genetik materialni mayda bo’laklarga bo’lish imkonini berdi.
  
• 
  Fizik usullar (agaroza gelidagi elektroforez) yordamida mazkur bo’laklarni o’lchamiga qarab ajratish, so’ngra har birini restriktsiya xaritalarini tuzish orqali alohida o’rganish mumkin bo’ldi.
  
• 
  DNK ni restriktsiyalash genetik injeneriyaning asosi bo’lib, olib borilayotgan genetik tadqiqotlarda keng qo’llaniladi.
  

Ishni bajarish tartibi:

1. 
   Kerakli plazmidalarni olamiz.
   
2. 
   Restriktazalarni olamiz (26-rasm).
   
3. 
   Plazmid qisqa vaqtga vorteks va short qilinadi.
   
4. 
   Ishlayotgan restriktaza va plazmidlar muzda turadi.
   
5. 
   Vektor ham muzda turadi.
   
6. 
   1-2 probirkaga quyidagicha tayyorlab olinadi:
   

-10x lik bufer - 4 mkl
-Sak 1 restriktaza- 1 mkl
-Bam H1 restriktaza – 1 mkl
7. Probirkadagi 3 mkldan 2 ga bo’linadi.
8. Topo XL vektor plazmiddan birinchi simplga 7 mkl qo’shiladi.
Bu plazmidning P bog’lari bor uchun o’zini o’zi ligaza qiladi.

2. 
   simplga biz kesmoqchi bo’lgan PBR 322 vektor plazmidi qo’shiladi.
   
1.