Scopul studiului aprecierea celei mai veridice metode de diagnostic a IH la gravide.
Material și metode
Studiul efectuat este de tip prospectiv pe un lot de 70 de gravide, în perioada anilor 2009-
2011 în cadrul IMSP SCM Nr. 1 și IMSP ICȘDOSM și C. În studiu au fost incluse gravide cu
HG primar sau recidivant. Diagnosticul de IH s-a stabilit în baza culegerii datelor anamnestice,
examenului obiectiv și testelor de laborator. Tabloul clinic începe de obicei cu apariția erupțiilor
herpetice - la a 2-3 zi apar erupţii pe un fon hiperemiat şi edemat: papule, vezicule, pustule care
ulceriază, apoi apar cruste, cicatrice şi zone hiperpigmentate [2,4]. Testele de laborator au fost
efectuate în cadrul Laboratorului Imunologic și au inclus: RPL serologică și din epiteliul
19
canalului cervical, deasemenea determinarea IgM, IgGp și IgGt. Precucrarea statistică a datelor
a fost efectuată în programul Microsoft Excel 2000, prin aprecierea testului de semnificație (t-
Student) și pragului de semnificație (p).
Rezultate și discuții
Conform datelor literaturii de specialitate până la moment nu există în diagnosticul IH o
metodă sigură, eficientă şi accesibilă. Medicul specialist stabileşte diagnosticul de herpes genital
prin colectarea anamnezei, inspecţia vizuală a zonei genitale în cazul în care leziunea este tipică
sau prin prelevarea unei probe din leziune, în cazul în care este atipică. Infecţia cu virusul Herpes
Simplex este dificil de diagnosticat între episoadele de reactivare, când nu existaă nici un fel de
leziuni [7,9].
Analiza datelor obţinute ce ţin de vârsta pacientelor în studiul dat a fost cuprinsă între 16 şi
42 ani, în mediu 27±1,2 ani, cu următoarea structură: până la 20 ani s-a apreciat în 11
(15,7%±2,15%) cazuri, 21-30 ani – 39 (45,7%±1,95%), 31-40 ani – 14 (20,0%±4,05%) cazuri,
iar după 40 de ani – 6 (8,6%±6,05%) cazuri (p > 0,05).
Diagnosticul de laborator este folosit pentru confirmarea etiologiei patologiei apărute în
formele atipice şi pentru diagnostic diferenţiat [3,5]. În studiul dat pentru stabilirea
diagnosticului de HG s-au abordat următoarele etape: acuzele, examenul obiectiv pentru
aprecierea erupţiilor caracteristice şi testele de laborator.
Astfel, pacientele incluse în studiu acuzau la inspecţia OG erupţii herpetice caracteristice
HG, în 100% cazuri, cu diversă localizare (vulvă, perineu, fese şi coapse).
Menţionăm că a fost apreciat stadiul de replicare virală prin detectarea fragmentelor de
ADN al HVS prin metoda molecular genetică, din aşa secrete biologice ca serul şi epiteliul din
canalul cervical. Am obţinut următoarele rezultate: reacţii pozitive au fost apreciate serologic în
9(12,9±4,01%) cazuri și ADN din ţesutul epitelial al canalului cervical pozitiv în 19(27,1±5,31)
cazuri, ( p>0,05).
La aprecierea statutului imunologic din serul sangvin, prin metoda ELISA au fost constataţi
Ac antiherpetici, ca rezultat am obținut IgM s-a estimat pozitiv doar în 17(24,3±5,13) cazuri.
Având în vedere rezultatele obținute, PCR serologic pozitiv doar 12,9%, PCR din epiteliul
canalului cervical pozitiv în 27,1%, la fel şi IgM pozitiv doar în 24,3%, ne-am propus să
întroducem o metodă nouă de diagnostic al IH la gravide prin separarea IgG în precoci şi tardivi,
deoarece IgG precoci sau pretimpurii se încep a sintetiza de la 3-5 zi a procesului infecţios şi se
menţin în sânge până la 1 lună, atât cât durează procesul inflamator acut.
Tab.1 Metodele de diagnostic a IH la gravide utilizate în studiu
Metode de diagnostic
Rezultatul
examinării
Prezența
erupțiilor
RPL
serologic
RPL din
epiteliul
cervical
IgM
IgGp
Abs./%
Abs./%
Abs./%
Abs./%
Abs./%
Pozitiv
70
100,0±0,0
9
12,9±4,01
19
27,1±5,31
17
24,3±5,13
63
90,0±3,59
Negativ
0
0%
61
87,1±4,01
51
72,9±5,31
53
61,4±5,82
7
10,0±3,59
20
Astfel în rezultatul datelor obţinute am constatat că IgGp au fost detectaţi în 90,0% cazuri.
Pe când IgGt au fost estimaţi în 3(8,6±4,74%) cazuri ( p>0,05) și servesc ca marcheri ai infecţiei
herpetice subacute sau cronice.
Prin urmare aprecierea în general a IgG anti herpetice este puţin informativ şi ne vorbeşte
doar de o infectare cu HVS, divizarea IgG antiherpetice în IgG precoci şi tardivi, ne-au permis să
apreciem stadiul infecţiei herpetice și să confirmăm necesitatea administrării tratamentului.
Aşadar aprecierea rezultatele înalte de IgGp în 90,0% la gravidele cu IH, ne permit să
constatăm forma de reactivare a infecţiei viral-herpetice şi să afirmăm necesitatea administrării
tratamentului deoarece virusul se află încă în stare de replicare şi este sensibil la tratamentul
antiviral.
Concluzii
1.
În rezultatul studiului efectuat am divizat IgG în IgGp (precoci) și IgGt (tardivi).
2.
IgGp servesc ca marcheri a IH acute sau în reactivare deoarece se încep a sintetiza din a 3
zi a procesului inflamator viral și se mențin serologic până la o lună.
3.
La gravidele cu herpes genital în baza studiului realizat s-a demonstrat că cea mai
veridică metodă de diagnostic a IH este metoda imunoenzimatică prin utilizarea truselor
de tip ELISA cu determinarea IgGp estimate în 90,0%.
Bibliografie
1.
Agop S. Opţiuni de diagnostic şi tratament în herpesul genital la gravide. Anale
ştiinţifice. USMF „Nicolae Testemiţanu”. Probleme actuale ale sănătăţii mamei şi
copilulii. Chişinău, 2009, vol. 5, p. 111-115.
2.
Burlacu A. Algoritmul de diagnostic și tactica conduitei gravidelor cu chlamidioză și
herpes genital. În: Buletin de perinatologie. Chișinău, 2003, nr. 2. 42-47p.
3.
Gavriliuc M., Casian M., Spânu C., Floca L. Infectarea sistemului nervos central prin
virusul Herpes simplex: considerații diagnostice și terapeutice. În: Analele științifice ale
USMF „Nicolae Testemițanu”. Chișinău. 2000. 305-310p.
4.
Орловская И. В. Диагностика внутриутробной герпес-вирусной инфекции с
церебралъными нарушениями. Автореф дис. канд. мед. наук. 1995.
5.
Ashley R. L. Laboratory techiques in the diagnosis of herpes simplex infection.
Genitourin. Med. 1993. vol. 69. 174-183p.
6.
Brown Z.A., Wald A., Morrow R. Et al. Effect of serologic status and cesarean delivery
on transmission rates of herpes simplex virus from mother to infant. JAMA. 2003. vol.
289. 2204-2208 p.
7.
Enright A. M., Prober C. G. Neonatal herpes infection: diagnosis, treatment and
prevention. Semin. Neonatal. 2002. vol. 25. 1-13 p.
8.
Ilona LF., Pia O., Marianne F. et al. Detection of herpes simplex virus DNA in dried
blood spots marking a retrospective diagnosis possible. J. Clin. Virol. 2003. vol.26. 39-
48p.
9.
Immergluck L.C., Domowicz M.S., Schwartz N.B. Viral and cellular requirements for
entry of herpes simplex type 1 into primary neuronal cells. J. Gen. Virol. 1998. vol. 79.
49-559p.
21
PRIN DETERMINAREA LA EXAMENUL HISTOLOGIC A PLACENTEI A
CELULELOR POLINUCLEATE UNNA
Silvia Agop, Olga Cernețchi, Virgil Popovici
Catedra Obstetrică și Ginecologie FECMF “Nicolae Testemițanu”
Summary
The assessing of a new marker in congenital herpes infection by determining
the Unna polynuclear cells during placental examination
It is very hard to diagnose the congenital herpes infection because till our days we do not
have any methods which could help in differentiating the maternal Ac from the fetal ones, and
the polymerase chain reaction for the viral DNA sequences is very expensive, inaccessible and it
requires serological, urinal and Cerebrospinal fluid (CSF) frequent repetitions. This was a
prospective study performed on a group of 140 placentas, divided into the 1st group of study
with a number of 70 pregnant women who were infected with genital herpes during their
gestation period, and the 2nd group which had a number of 70 healthy pregnant women. During
this study there was carried a histological examination of the placenta and were found the Unna
polynuclear cells, which are specific just for the Herpes simplex virus and they serve as markers
in the congenital herpes infection.
Rezumat
Infecția herpetică congenitală este dificil de diagnosticat, deoarece până la moment nu există
metode de a diferenția Ac materni de cei fetali, iar reacția de polimerizare în lanț pentru
aprecierea fragmentelor de ADN viral este costisitoare, neaccesibilă și necesită repetări frecvente
atât serologice, urinare și a lichidului cefalorahidian. Studiul efectuat a fost de tip prospectiv pe
un lot de 140 de placente, divizat în lotul Ide studiu ce a cuprins 70 de gravide care au suportat
herpes genital în timpul perioadei de gestație și lotul II de control alcătuit din 70 gravide
sănătoase. În cadrul studiului s-a efectuat examenul histologic a placentei și s-au depistat celulele
polinucleate Unna, specifice doar pentru virusul herpes simplex și servesc ca marcheri a infecției
herpetice congenitale.
Actualitatea
Infecţia herpetică reprezintă o problemă acută a obstetricii şi perinatologiei, condiţionată de
rolul VHS în infectarea fătului şi nou-născutului, care ulterior se manifestă prin probleme
neurologice, somatice şi endocrine la noi – născuţi, sugari şi copii de vârstă preşcolară [2].
Familia Herpetoviridae inclusiv VHS, ocupă locul doi după teratogenitate, pe primul fiind
virusul rubeolei [2].
Rata transmiterii materno-fetale a HVS de la mama cu infecţie herpetică primară şi recurentă
în sarcină este de 1,4-32% [1,2]. Procentul nou-născutilor cu Ac la HVS variază de la 40-90% în
dependenţă de cantitatea Ac la mamă care trec bariera placentară. Cantitatea Ac se micşorează în
primele luni după naştere, dar la vârsta de la 6 luni până la un an titrul scade brusc [1,3].
În majoritatea cazurilor, fătul este infectat în timpul viremiilor, prin pasajul transplacentar al
HVS sau prin continuitate pe cale ascendentă de la secreţiile cervicale. Transmiterea materno-
fetală a HVS se poate produce pe tot parcursul perioadei de gestație. Peste 2-3 săptîmâni de la
infectare va urma viremia fetală, apoi viruria şi viramnia. Consecinţe mai grave va avea
infectarea în prima jumătate a sarcinei, cu implicarea sistemului nervos central al fătului, ceea ce
se va manifesta prin retard mintal, tetraplegie spastică şi dereglări oftalmice [1,4].
Infectarea perinatală cu HVS se realizează în timpul naşterii prin secreţii cervicale şi
postpartum prin laptele matern şi are consecinţe negative asupra dezvoltării neuropsihice
22
ulterioară a copiilor [4,6]. Infectarea fătului mai frecvent se înregistrează în infecţie herpetică
genitală cronică cu evoluţie atipică şi asimptomatică [2,6].
Infecţia herpetică intrauterină după Cudaşov H. I. (1994), este una din cauzele ce duce la
mortalitate şi morbiditate perinatală, invalidizare în rezultatul paraliziei cerebrale infantile şi
epilepsiei.
Datorită tropismului VHS faţă de ţesutul nervos, conform autorilor A.F. Puhner, V. I.
Cozlova (2003), infectarea fătului se poate solda cu apariţia de: hidrocefalie, microcefalie,
dilatare de ventricole şi atrofia substanţei cenuşii.
Herpesul genital poate condiţiona întreruperea intempestivă a sarcinei, apariţia anomaliilor
de dezvoltare şi decurge malign pe fonul stării de imunodeficit fiziologic a nou-născutului,
achiziţionând forme severe a bolii ce au ca final decesul sau invalidizarea fătului [2,6].
Infecţia ascendentă din colul uterin se asociază cu reproducerea şi acumularea virusului în
lichidul amniotic şi se manifestă prin polihidramnioză, retard de creştere intrauterină, sindrom
edematic, prematuritate, însă afectarea fătului poartă un caracter mai slab pronunţat faţă de
infectarea transplacentară [2,5].
Formele clinice a infecţiei herpetice la făt sunt: localizată tegumentară, se întâlneşte la noi-
născuţi în 0,5%, localizată cu afectarea SNC care se manifestă prin - encefalită,
ventriculomegalie, hidrocefalie, chisturi cerebrale, microcefalie, atrofia substanţei cenuşii, glioză,
incidenţa este de 35%, letalitatea pe fon de tratament este 25%, cu tratament 15% şi diseminată
manifestată prin sepsis – letalitatea fără tratament este 90%, cu tratament 57% [2,3].
Diagnosticul clinic al infecţiei herpetice la copii impune colectarea minuţioasă a
anamnesticului bolii şi evoluția sarcinei prin aprecierea frecvenței recidivelor herpetice,
examenul de laborator a urinei, sângelui şi salivei copilului prin PCR şi IgM, în consiliu cu
pediatrul, infecţionistul şi neurologul [6].
Cercetările histologice a placentelor colectate de la gravidele cu infecţie herpetică, au permis
de a determina modificări inflamatorii ca: deciduita, placentita, amnionita şi vilozita [3,4].
În pofida informaţiilor prezentate anterior, precum că imunitatea maternă preexistentă (Ac
antiherpetici) ar reduce substanţial transmiterea transplacentară şi severitatea infecţiei
congenitale cu HVS la nou-născuţi nu a influenţat semnificativ consecinţele infecţiei neonatale
[6].
În ultimii ani, unul dintre subiectele cele mai discutate în managementul infecţiei
congenitale cu HVS este descoperirea unor marcheri (virusologici, imunologici sau imagistici)
cu semnificaţie pronostică pentru evoluţia IH şi dezvoltarea sechelelor tardive. Acest lucru ar
oferi o serie de avantaje, inclusiv consilierea corespunzătoare a mamei şi punerea în aplicare a
unor intervenţii promte pentru copii cu risc major de handicap. Pacienţii ar putea fi, de
asemenea, repartizați în funcţie de riscul de sechele neurologice, prioritizânduse tactica de
tratament antiviral. Astfel, s-a constatat că unele modificări imunologice, calcinate intracerebrale
şi ventriculomegalie care pot servi ca marcheri pronostici pentru sechele neurologice tardive.
Scopul studiului depistarea în placentă prin intermediul examenului histologic, a celulelor
polinucleate Unna specifice doar pentru HVS, ce vor servi ca marcher a infecției herpetice
congenitale.
Material și metode
Studiul de tip prospectv a fost efectuat pe un lot de 140 de gravide, divizat în două loturi - I
de studiu alcătuit din 70 de gravide ce au suportat infecție herpetică pe parcursul perioadei de
gestație și lotul II de control a cuprins 70 de gravide sănătoase. După naștere sau colectat anexele
fetale ce au fost supuse examenului histologic pentru aprecierea celulelor polinucleate Unna.
Studiul s-a realizat în perioada anilor 2009-2011 în cadrul IMSP ICȘDOM și C secția
23
morfopatologie. Precucrarea statistică a datelor a fost efectuată în programul Microsoft Excel
2000, prin aprecierea testului de semnificație (t-Student) și pragului de semnificație (p).
Rezultate și discuții
Explorările histopatologice au pus în evidenţă o gamă largă de modificări din partea
componentelor structural-funcţionale ale placentelor şi anexelor cu implicaţia acestora în divers
raport. În cadrul examinărilor histopatologice uzuale modificări lezionale cu implicaţii a
elementelor corionului vilar, spaţiilor interviloase, membranelor deciduale bazale şi parietale s-
au depistat în ambele loturi, în lotul I în 12 (34,3±8,02%) cazuri, comparativ cu lotul II în
3(4,3±2,42%) cazuri (p<0,05).
Analiza histologică a relevat modificări cu caracter inflamator în placentă în lotul I s-au
estimt 10(28,6±5,67%) cazuri și lotul II în 5(14,3±5,92%) cazuri. După localizarea procesului
inflamator în țesuturile placentei s-a apreciat deciduită bazală la 16,12±6,22% în sublotul I
comparativ cu nici un caz în lotul II (p>0,05). Deciduita parietală a fost depistată în 19,1±6,64%
în lotul I, comparativ cu lotul II unde nu a fost depistată (p>0,05). Frecvența velozitei și
intervelozitei a fost estimată în 23,5±7,17% în lotul I comparativ cu 8,2±4,64% lotul II, ceea ce
confirmă lezarea mai profundă pe cale hematogenă a corionului vilar, (p<0,05).
De asemenea în cadrul cercetării histologice a fost apreciate procese inflamatorii celulare
limfocitare estimate în lotul II în 5(14,3±5,92%) cazuri, comparativ cu 13(37,1±8,17%) cazuri în
lotul I, aceste manifestări sunt caracteristice pentru un proces inflamator viral, (p<0,05,
p<0,001).
Printre cele mai frecvente modificări circulatorii constatate au fost pseudoinfarctele, care s-
au apreciat în 20(28,6±5,40%) cazuri în lotul I, comparativ cu 3(4,3±2,42%) cazuri în lotul de
control. Altă modificare circulatorie estimată a fost apoplexia zonală cu microdecolări precoce,
ce a fost identificată în 19(54,3±8,42%) cazuri în lotul I și doar 1(1,4±1,40%) caz în lotul II.
Deasemnea s-au depistat hemoragii și trombi interviloși în vase în 10(28,6±7,64%) cazuri în
lotul I și 2(2,9±2,01%) cazuri în lotul II, (p<0,05).
Modificări involutiv-distrofice manifestate prin calcinoză și fibroză micro-macrofocală
zonală sau dispersă s-au estimat în 26(18,6±3,29%) cazuri din loturile studiate, din ele pentru
lotul I corespund 20(51,9±8,45 cazuri, comparativ cu 6(17,1±6,36%) cazuri în lotul de control
(p<0,001).
.
Fig.1. Endovasculite de origine virală în pars decidua bazalis. Proliferarea endoteliului,
polimorfism nucleo-citoplasmatic tip- gigantocelular (celule Unna). Histopreparat. Coloraţie
hematoxilin-eozină × 400.
24
Destul de frecvent s-au depistat diverse ectazii vasculare la nivelul corionului vilar, zone cu
reducerea spaţiilor interviloare, persistarea unor grupuri de vilozităţi imature cu o ramificaţie
asimetrică a corionului vilar estimate în 28(20,0±3,38%) cazuri, în lotul de studiu, comparativ
cu 3(4,3±2,42%) cazuri în lotul de control, (p<0,01, p<0,001).
Un moment testat în studiile microscopice a fost procesele proliferativ compensatorii
manifestate histologic prin proliferarea sincițiului și angiomatoza capilară care s-a apreciat în
9(25,7±7,39%) în lotul I, (p>0,05) și nici un caz în lotul II de control, (p>0,05).
Fig.2. Vilozită infiltrativ-productivă -150. Infiltrat din limfocite, fibroblaste, polimorfism
nucleo-citoplasmatic tip-gigantocelular (celule Unna) în zona subepitelială a vilozităţilor coriale.
Fig.3. Intervileită, vileită cu neoformarea simplaştilor celulari polinucleari (celule Unna).
Coloraţie hematoxilin-eozină × 200.
25
Un moment oportun al studiului efectuat a fost aprecierea polimorfismului celular a virusul
herpetic. Polimorfismul celular necleo-citoplasmatic tip-gigantocelular este specific doar pentru
IH. Acestea reprezintă așa numitele celule polinucleate, după autor Unna. Celulele Unna cel mai
frecvent sunt depistate în endoteliocitele vaselor din pars decidua bazalis și reprezintă celule
infectate cu HVS în diferite faze de replicare ele devin polinucleate.
Infecția herpetică congenitală este extrem de dificil de diagnosticat deoarece până la moment
nu există tehnici de a diferencia Ac materni de Ac fetali, iar PCR este costisitoare , necesită
repetări frecvente deoarece perioada de replicare virală herpetică durează în mediu 10 zile și des
sunt estimate rezultate fals negative. Aceste celule polinucleate Unna ne servesc ca criteriu în
diagnosticul IH congenitale, estimând infectarea hematogenă cu HVS a anexelor fetale. În cadrul
studiului celulele Unna au fost apreciate în 12(34,29±8,02%) cazuri în lotul I comparativ cu nici
un caz în lotul de control (p<0,001).
Ulterior vor fi prezentate imaginile examenului histologic a placentei ce relatează
modificările inflamatorii, involutiv-distrofice, proliferativ-compensatorii și circulatorii,
deasemenea celulele polinucleate Unna, marcher de diagnostic a IH congenitale.
Concluzii
1.
Examenul complex morfopatologic aplicat a stabilit frecvenţa majoră a leziunilor de
origine inflamatore şi discirculatorii de divers grad de activitate cu implicaţii considerabile
ale componentelor structural-arhitectoniale şi funcţionale ale placentelor ce pledează
destul de semnificativ pentru coexistenţa acestora în caz de IH la mamă.
2.
Studiul histologic complex ne-a permis să apreciem celulele polinucleate Unna, specifice
doar pentru IH și ne servesc ca marcher a IH congenitale.
Dostları ilə paylaş: |