Page 403
CRISPR lokusidagi DNK ketma-ketligi bir xil uzunlikdagi ajratuvchi intervallar bilan
"DNK-ketma-ketliklari" -interval-"DNK-ketma-ketliklari" tarzida ajratilganligi
sababli, ushbu takrorlanishlar "CRISPR—Clustered regularly interspaced short palindromic repeats" ya’ni guruhlangan muntazam qisqapalindromli takrorlanishlar
nomini olgan [13].
CRISPR/Cas tizimi Cas effektor modulining arxitekturasiga ko'ra ikki sinfga
bo'linadi. Birinchi sinfga bir nechta subbirliklardan iborat Cas oqsil komplekslari bilan
tavsiflanadigan I, III va IV tiplar kiradi. Ikkinchi sinf esa II, V va VI turlarini o'z ichiga
oladi va u faqat bitta katta Cas oqsilidan iborat [14]. CRSPR / Cas9 tizimi ikkinchi
sinfga mansub bo’lib, uchta komponentdan Cas9, crRNA va tracrRNA (transaktiv
crRNK) iborat. crRNA nishonlangan DNK fragmentining nukleotid ketma-ketliklari
bilan komplimentarlik asosida bog'langan qisqa intervalli ketma -ketliklarni o'z ichiga
oladi va trakrRNK bilan aynan shu nukleotid juftliklarini takrorlaydi. crRNA va
tracrRNA Cas9 bilan kompleks hosil qilganda, Cas9 faollashadi [15].
CRSPR / Cas9 tizimi ilk bor 2013-yilda sichqon va inson hujayralari genomini
tahrirlashda muvaffaqiyatli qo'llanilganidan buyon, butun dunyo miqyosida arabidopsis,
tamaki, guruch, zig'ir, bug'doy, makkajo'xori, pomidor, kartoshka, bodring kabi ko’plab
o'simliklarga keng tadbiq qilinmoqda [16].
CRISPR/Cas9 texnologiyasini soya o’simligida ilk bor 2015-yil beshta jamoa
ishida o’simlikning ildiz tizimida hamda somatik embrionlarida maqsadli mutatsiyalarni
hosil qilish uchun Agrobacterium rhizogenes vositasida qo’llanilgan. Natijada tukli ildiz
tizimiga ega o’simliklar olingan [2,8,18,19,20]. Li va uning jamoasi soya genomini
tahrirlash uchun mos bo'lgan Cas9-gRNA tizimini qo’llab, NHEJ (non-homologous end
joining) orqali qariyb 76% maqsadli mutagenezga erishdi. Shu bilan birga HDR
(homologous directed repair) orqali genomni tanlangan qismida genlar maqsadli
integratsiyalashgan mutant o'simliklarni hamda asetolaktat sintaza1 (ALS1) geni
mutatsiyaga uchragan xlorsulfuronga chidamli soya oldi [8]. Keyinchalik, soya
genomini tahrirlash bo'yicha tadqiqotlar asosan Cas9/sgRNK transgenlarini o'z ichiga
olgan eksplantlardan qayta tiklangan mutant o’simliklar yordamida olib borildi [9,10].
Jumladan, CRISPR/Cas9 tizimi va Agrobacterium rhizogenes vositasida
transformatsiya qilish texnolgiyasidan foydalangan holda, Cai o’z laboratoriyasida
gullashga javob beruvchi GmFT2a genini funksiyasini yo'qolishi gullash vaqtini
kechiktirishi mumkinligini aniqladi. Shuningdek, ular soya genomidagi katta
fragmentlarni olib tashlash uchun ikkita sgRNA/Cas9 tizimini ishlab chiqdilar va bu
mutatsiyalar avlodlarga o'tishi mumkinligini tasdiqladilar [19].
2016-yilda Du TALENs va CRISPR/Cas9 tizimini tahrir qilish samaradorligini
fitoen desaturaza sinteziga aloqador ikkita GmPDS11 va GmPDS18 genilari asosida
tukli ildizga ega soya o’simliklarida solishtirdi [20]. Natijalar GmU6-16g-1 promotridan
foydalangan holda CRISPR/Cas9 tizimini qo’llash bir vaqtning o'zida ikkita allelni